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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

[交流] 酵母感受态细胞

做酵母KM71H感受态细胞时,100mlYPD过夜培养后OD600达到2.3(郁闷,长的这么快,才接了100ul),请问各位虫友,还能做感受态细胞吗:
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仕不可不弘毅,任重而道远
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
墨香若水(金币+2,VIP+0):多谢沙发,我也决定再转接一下,又得多等一天了,第一次做,好多不熟悉。 9-8 10:27
最好不要了吧,不是说在1.3-1.6最好嘛,既然长得快再用这个转接一下不就行了,不过也可以冒险,感受态没那么绝对,就看你时间紧不紧了。
砖石王老三!!!
2楼2009-09-08 09:44:52
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anne-he

金虫 (小有名气)


墨香若水(金币+1,VIP+0):多谢交流~长到1.9那也再转接一下好了。 9-8 10:28
哇,你的长得那么快,我昨天也做了,GS115的,100ml接了500ul长了16小时才OD才0.7,结果过了三个小时看,长到1.9,郁闷。
3楼2009-09-08 10:17:34
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


墨香若水(金币+1,VIP+0):大家都说不行哦~ 9-8 22:27
问题不大
4楼2009-09-08 11:45:34
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黑罕

金虫 (小有名气)

★ ★
墨香若水(金币+1,VIP+0):谢谢啦 9-8 22:23
墨香若水(金币+1,VIP+0):多谢交流 9-8 22:28
不要了
除非你对你的转染水平很有信心
5楼2009-09-08 11:57:29
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your2007

至尊木虫 (著名写手)


墨香若水(金币+1,VIP+0):恩,我今晚转接了又,多谢交流 9-8 22:27
接种量再小点吧,我用的是X-33,培养过夜差不多,
爱人者被爱,敬人者人敬
6楼2009-09-08 12:13:37
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


墨香若水(金币+1,VIP+0):液体的100ul,OD大于3一般才不准吧,做感受态OD要求好像是1.3-1.6:多谢版主交流 9-8 22:26
你是挑colony吗?还是用液体的?OD值大于1的时候要稀释才能测定否则会不准确的,所以,有可能是你之前的OD值没测准确,还有就是你稀释到0.3之后再做培养,到第二代的OD=1.3-2.0再离心收集,做感受态细胞
会当凌绝顶,一览众山小
7楼2009-09-08 21:47:10
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
其实如果只要得到几十个转化子用于筛选表达的话应该是可以的
8楼2009-09-09 08:06:32
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
比如你过夜培养后OD600已经在3.0,取1ml+9mlYPD培养基稀释到0.2-0.4之间,继续摇菌2-3h,OD600在0.8-1之间即可拿来做感受态,
9楼2009-09-09 10:03:13
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