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外泌体癌症早诊文献分享: 领取红包 (小木虫手机app专属红包)

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这一期分享一篇关于外泌体癌症早诊的文章[1]，就是用纳米流式来检测结直肠癌患者细胞外囊泡的蛋白表达和粒径的表征分析。外泌体研究的一个很重要的目标还是癌症的诊断和治疗，目前结直肠癌已经成为世界第三大癌症。如果能建立结直肠癌早期的体液诊断方法，那么对于这个癌症的治疗和预后都是很有帮助的。

我们来看看这篇文章是怎么研究的。首先是用纳米流式对分离出来的EV纯度进行评估，因为脂蛋白和其他一些污染物不可避免地在分离物中共存，而EV的高质量纯化对于下游生化分析的准确性至关重要。这里也是用triton裂解EV的磷脂膜，处理前后分别检测颗粒浓度，用这种方法来评估不同来源EV的纯度。

接下来是评估EV的粒径分布。因为这是影响细胞摄取的重要物理特性，包括细胞间的通信和治疗效率。这里比较了纳米流式和冷冻透射电镜以及NTA这几个平台对EV粒径分布分析结果的区别。可以看到结果的对比，纳米流式得到的结果峰值为50nm，和冷冻透射电镜的55nm比较接近，而且纳米流式统计的是上万个颗粒的结果，更具有统计代表性，而且速度很快。而NTA的结果偏差就比较大了，有105nm。

本研究还首次在外泌体水平验证了CD9、CD63和CD81这几个高表达蛋白，并且通过校准PE荧光强度和单个PE偶联的单克隆抗体的荧光强度中位数，得到了每个EV上结合的抗体数量，因为纳米流式的荧光灵敏度很高，可以检测到单个PE分子。另外采用双染研究CD9、CD63和CD81在单个EV表面的共表达情况。

然后接下来就是研究结直肠癌细胞系中EV表面CD147表达情况。用一株普通结直肠细胞和两株结直肠癌细胞分离的EV进行CD147标记，通过纳米流式分析发现2株癌细胞的阳性率都明显高于正常细胞，这个结果跟western-blot的结果是一致的，并且用纳米流式还能得到一些更具体的信息，比如HCT116是粒径更大的这部分EV高表达CD147。

然后取临床血浆样本进行分析，首先是发现癌症患者和正常人样本中总的EV浓度没有差别，但当对其中的CD147进行标记之后，发现癌症患者的CD147阳性率明显高于正常人的，大概有7.1倍。并且发现不同分期的患者，在1期就已经是高表达了，术后的指标也是明显下降。虽然还需要更多临床样本，以进一步验证使用CD147阳性EV进行结直肠癌诊断和治疗监测的可行性，但这一结果足以表明，使用疾病特异性EV标志物在诊断和预后方面具有巨大的潜力。

参考文献：

[1]Tian, Y; Ma, L; Gong, M; et al.Protein Profiling and Sizing of Extracellular Vesicles from Colorectal Cancer Patients via Flow Cytometry.[J].ACS Nano.2018,12(1):671-680