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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 其他 » 稳定细胞株系构建问题请教
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实验做不完

新虫 (初入文坛)

[交流] 稳定细胞株系构建问题请教

各位前辈，本人在构建稳定细胞株系时，遇到一个问题一直未能解决，即在筛选单个克隆时，经过两周培养，96孔培养板中细胞始终不增殖，这是为何？我培养的是293悬浮细胞，铺板密度是0.8个/孔，共铺板600个，静置放在37℃，5％CO2培养箱中培养。恳请指教
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1楼 2022-04-08 17:38:32
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ljh2222

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
293细胞本身就不适合构建稳转细胞株，可以考虑替换细胞系 如CHOS K1。 如果仍要使用293构建建议：1、确保空细胞能适应96孔板体系正常生长。2、保证生长因子充分，可以在铺单克隆的时候可以做混料：新鲜培养基+293空细胞细胞上清 2：1混合。  3、如果是纯CD培养基的话建议做一些培养基筛选，推荐OPMCD05培养基。       希望对你有所帮助。
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2楼2022-04-25 15:10:13
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