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honglanbai木虫 (正式写手)
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[交流]
无菌间的含菌量测定方法
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谁知道细胞培养间的有多少细菌，如何测定啊。 [ Last edited by 350784478 on 2009-9-7 at 07:37 ] |
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liujunhero
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2楼2009-09-06 20:18:58
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补充点知识 无菌室的要求 1．工作室应矮小、平整，面积只需4平方米左右，（当然，如果是多人同时操作的话，可以考虑加大点）高2.2—2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌。) 2．室内采光面积大，从室外应能看到室内情况。 3．为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。 4．无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外。 5．无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。 6．无菌室的使用与管理 （1） 无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放最必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。 （2） 室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动。 （3）每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时。E（4） 定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底消毒灭菌。无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个（平板直径均9厘米），置无菌室各工作位置上，开盖曝露半小时，然后倒置进行培养，测细菌总数应置37℃温箱培养48小时；测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌`霉菌总数均不得超过10个为 。 （5） 无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位（待检物例外），然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用。 （6） 进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。 （7） 操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。器材及场所的灭菌消毒微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法。 1． 高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理。 2． 火焰灭菌： 接种针、接种环等可直接火焰灭菌。 3． 高温干燥灭菌： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时. 4． 一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。 5． 空气的消毒： 开启紫外灯照射30—60分钟 即可。 操作要领W-）准备工作： 1． 先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟。 2． 检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒。 3． 操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室。 4． 进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。 操作过程注意事项 1． 动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境。 2． 操作应在近火焰区进行。 3． 接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧 灭菌。 4． 使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。 5． 观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大开，而是上下盖适当开缝。 6． 进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。 7． 工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。. |
3楼2009-09-06 20:19:21
4楼2009-09-07 11:14:28