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许阿君

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母GS115表达

各位虫友们好,我是做毕赤酵母转化的,载体为pPICZαA,现在遇到了表达的抗菌肽无活性的问题。操作:
挑多个单菌落于25mlBMGY(250ml锥形瓶)培养基中,养一天半左右,换成200ml的BMMY培养基(500ml锥形瓶),每天加甲醇诱导,但是没有活性(上半年养的最后一批上清也没有抑菌圈,但是过了一个寒假,放在四度里,又有活性了)
此外,在BMGY培养基里养的时候,浓度也上不去,到达不了文献里说的那么高(要求OD600达到8.0)

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ericdoner

新虫 (初入文坛)

BMGY时间再长点?我们BMGY摇过三天

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2楼2022-04-09 08:07:05
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ericdoner

新虫 (初入文坛)

而且建议等体积更换,即多少BMGY就换到多少BMMY中,不要做稀释,同时培养基体积不应该超过瓶体积的1/3。

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3楼2022-04-09 08:08:53
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4楼2022-04-09 08:37:00
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许阿君

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ericdoner at 2022-04-09 08:08:53
而且建议等体积更换,即多少BMGY就换到多少BMMY中,不要做稀释,同时培养基体积不应该超过瓶体积的1/3。

感谢虫友,现在已经排除了BMGY浓度过低的问题,正在做等体积交换培养基,看看是否会好

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5楼2022-04-21 22:48:41
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澜沧的爱

新虫 (小有名气)

我觉得诱导表达完之后,跑蛋白电泳看下有没有目的条带。确定下是没有表达还是表达了没活性

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6楼2022-04-22 07:09:38
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许阿君

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ericdoner at 2022-04-09 08:08:53
而且建议等体积更换,即多少BMGY就换到多少BMMY中,不要做稀释,同时培养基体积不应该超过瓶体积的1/3。

还有个问题,你的酵母菌株是从原板上表达的,还是冻存了甘油菌以后重新表达的呢

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7楼2022-04-23 16:43:44
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