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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒双酶切出现四条带
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匿名

管理员

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1楼 2022-04-03 00:23:07
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lin_7722

实习版主

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总结一下（个人猜测）①菌胞裂解过度

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19楼2022-04-03 15:15:47
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lin_7722

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
②质粒提取，吸附到沉淀

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20楼2022-04-03 15:17:03
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lin_7722

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
你提完质粒有检测吗?（手动吃瓜.jpg）如果质粒没问题，不应该有四条带的，重做吧

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22楼2022-04-03 15:41:10
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lin_7722

管理员

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有可能是在质粒提取过程中，裂解液裂解过度，或者吸上清吸到了沉淀（有一些bp相似的dna污染）

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18楼2022-04-03 15:12:52
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lin_7722

超级版主

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
③洗脱液加的太少了，plasmid洗脱效率不高加之有沉淀，导致出现＞3条带的情况（其实最有可能的情况是裂解过度，建议温和地进行重提plasmid）试剂盒提plasmid的话Solution Ⅱ时间不超过4min，动作温和

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21楼2022-04-03 15:20:49
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匿名

专家顾问

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24楼2022-04-03 18:15:38
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s150535912

主管区长

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒不是有三种状态，环形，线性还有半线性，再加上你切去的片段呢

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30楼2022-04-04 17:02:35
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jurkat.1640

实习版主

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引用回帖:
24楼: Originally posted by 知风岁月 at 2022-04-03 18:15:38
我用空质粒酶切做了个对照，发现空质粒双酶切会出现三条带。
...

没有完全切开的质粒、切开的大片段、切开的小片段
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34楼2022-04-05 17:21:02
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lin_7722

实习版主

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换酶/重提质粒吧。有可能你的酶切位点和多克隆酶切位点是重复的，有可能把质粒切开

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35楼2022-04-17 10:41:08
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lin_7722

主管区长

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
也可以不重选酶，选取目的分子量条带就好~

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36楼2022-04-17 11:02:04
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PeterTsai

版主

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
逐步排除吧
1. 先看四个加起来是否等于你的质体+片段大小？
    (1) 如果是可能就是你的片段有多的切位
    (2) 否的话看2.
2. 如果其中 2~3 条加起来是否等于质体+片段大小?
    (1) 如果是的话可能就是酶切不完全
    (2) 如果否的话可以单酶切看看
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37楼2022-04-17 21:29:20
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科研蛙2楼
2022-04-03 00:29   回复  
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tzynew3楼
2022-04-03 00:29   回复  
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wzlo4楼
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silver995楼
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yi心灵感应6楼
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rcyvxu7楼
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bodygb8楼
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MajicKID9楼
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wyj97010楼
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zhangcarlm11楼
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柏拉图之恋12楼
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wdmzhang13楼
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超级老快14楼
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lixinlihu15楼
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69444354616楼
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jinvijie23楼
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云在青天25楼
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cayoo27楼
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zouhongs28楼
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s15053591229楼
2022-04-04 17:01   回复  
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cinema-A31楼
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yqhuo32楼
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澜沧的爱33楼
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