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Ffffword

新虫 (小有名气)

[交流] 细菌同源重组双交换问题。 已有3人参与

我用的pDM4同源重组对细菌进行基因敲除。接合后用双抗平板筛出单交换菌株。然后20%蔗糖LB液体里面培养12小时后在20%蔗糖LB平板上划线,长出来的菌在氯霉素平板上也能长。这样一直筛不到氯霉素抗性消失的双交换菌株。有没有遇到过这种情况的友人能分享一下经验

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MAIT

新虫 (小有名气)

★
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我想问一下,将T4连接产物转化进入S17-1的时候,你的板子上多就会长出菌来呀?
2楼2022-05-10 21:15:33
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linounuo

新虫 (初入文坛)

★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by MAIT at 2022-05-10 21:15:33
我想问一下,将T4连接产物转化进入S17-1的时候,你的板子上多就会长出菌来呀?

你解决了吗?我长出来是一片菌苔,然后用PBS冲洗下来之后涂板,第一次双抗筛选还是一篇菌苔
3楼2022-10-28 20:51:31
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Ffffword

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by linounuo at 2022-10-28 20:51:31
你解决了吗?我长出来是一片菌苔,然后用PBS冲洗下来之后涂板,第一次双抗筛选还是一篇菌苔...

验证一下抗性对不对

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4楼2022-11-01 15:02:16
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清醒的瞌睡虫

新虫 (小有名气)

★
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你好,请问问题解决了吗?双交换都是野生的,有什么方法可以借鉴一下吗
5楼2025-05-22 16:31:13
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