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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 转化问题
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liby

铜虫 (初入文坛)

[交流] 转化问题

目的基因和9K用Snab1、Not1酶切后，16度连接，转大肠。用3‘AOX、5’AOX做引物进行菌液PCR，电泳结果是600bp处有带，没我的目的基因，是怎么回事啊
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1楼 2009-09-05 10:03:00
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paulajjh

木虫 (著名写手)
你用酶切检测试试
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2楼2009-09-05 11:00:37
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
你是双酶切啊，那连接成功率会变得很低，因为这样要进行双交换，改成单酶切会好一点！
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砖石王老三！！！
3楼2009-09-05 14:05:49
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liby

铜虫 (初入文坛)
不能单酶切还得表达呢，关键还是分步酶切
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4楼2009-09-09 16:06:58
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你提质粒后再做一下PCR验证，有时候用菌液做不出来，用质粒就可以做出来！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
5楼2009-09-09 17:12:35
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切完全否，有无电泳图？如果酶切没有切好，那么后面的连接就会有问题，如果连接没有问题，最好是抽提质粒再PCR
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6楼2009-09-09 21:32:26
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