诡异PCR扩增，扩出来一次，就再也扩不出来了 - 生物科学

11楼2009-09-06 08:26:32

wenlin_chang

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很正常,注意你的引物.

12楼2009-09-06 08:33:08

小白3521

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引物最好在开始用的时候就分装一下
可以避免污染

13楼2009-09-07 09:54:42

tingdandan

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我现在也出现这种问题，老板说可以换个人给你做做，这个随机性很强的，我打算叫我师弟帮我做做看，我几乎排查了所有原因了，之前能扩增出来的现在都扩增不出来了，一起努力！多试几次

14楼2009-09-08 13:39:31

雨雪霏霏9992

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看看酶，PCR用的酶很容易失活的，我每次都是把所有东西都配好了再加酶

15楼2009-09-09 15:58:54

selina007

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我们也常遇到这种问题，主要和引物、模板关系较大
建议重新设计引物或更换新的模板

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16楼2009-09-15 17:43:09

taork

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PCR就几个因素，第一模板：可能你的基因组在反复冻融中断裂，建议重新抽提基因组或更换模板
第二：引物，一般引物会有二聚体（设计好了可除去），你可以观察50bp左右有没有浅带即可，不行就换引物
第三：其他试剂，一般不会出现问题，最好就是所有试剂均换一套，可借同学的使用
另外非特异性扩增也必须注意，留样也是其一。

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17楼2009-09-19 07:48:53