诡异PCR扩增，扩出来一次，就再也扩不出来了 - 生物科学

11楼2009-09-06 08:26:32

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wenlin_chang

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很正常,注意你的引物.

12楼2009-09-06 08:33:08

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小白3521

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引物最好在开始用的时候就分装一下
可以避免污染

13楼2009-09-07 09:54:42

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tingdandan

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我现在也出现这种问题，老板说可以换个人给你做做，这个随机性很强的，我打算叫我师弟帮我做做看，我几乎排查了所有原因了，之前能扩增出来的现在都扩增不出来了，一起努力！多试几次

14楼2009-09-08 13:39:31

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雨雪霏霏9992

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看看酶，PCR用的酶很容易失活的，我每次都是把所有东西都配好了再加酶

15楼2009-09-09 15:58:54

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selina007

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我们也常遇到这种问题，主要和引物、模板关系较大
建议重新设计引物或更换新的模板

16楼2009-09-15 17:43:09

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taork

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PCR就几个因素，第一模板：可能你的基因组在反复冻融中断裂，建议重新抽提基因组或更换模板
第二：引物，一般引物会有二聚体（设计好了可除去），你可以观察50bp左右有没有浅带即可，不行就换引物
第三：其他试剂，一般不会出现问题，最好就是所有试剂均换一套，可借同学的使用
另外非特异性扩增也必须注意，留样也是其一。

17楼2009-09-19 07:48:53

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guoguotianwai

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分子生物学实验就是这样，很难做，只能慢慢做了，一定要详细记录每次实验细节，然后慢慢摸索条件。

18楼2009-09-19 09:23:21

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bioxixi

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偶不是高手，但是遇到好多类似的情况
如果排除是模板，引物、试剂、酶的问题，那就多做几次，锲而不舍地做，有空就去做一管，每天做1-2管就可以了，不要对它抱太大希望，但是突然就会出来了。这时你要做的是凝胶成像、切胶纯化。。。