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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取后电泳大小与预期不符
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天兆9611

铁虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取后电泳大小与预期不符 已有2人参与

楼主使用的质粒是pBEmpM4a和pSIP502，两者大小都约是7kb。都接种于含有红霉素的LB培养基中。使用的提取方法为百泰克高纯质粒小量制备试剂盒方法提取，提取后用RNase 37 ℃孵育40 min。电泳使用的是1%的琼脂糖浓度，用的是宝日医的Supercoiled DNA Ladder Marker。
结果如图，左起依次为maker，pBEmpM4a，pSIP502。
发现maker 7 kb处没有条带，有比预期很大的条带。
请问我是哪里出了问题？是否要做酶切验证？

质粒提取后电泳大小与预期不符


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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懵懂的小白
1楼 2022-03-23 20:59:53
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正常，你提取的质粒开环了比超螺旋的marker对比慢很多正常
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3楼2022-03-24 11:26:45
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天兆9611

铁虫 (小有名气)
顶

发自小木虫Android客户端
2楼2022-03-24 10:37:49
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天兆9611

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-03-24 11:26:45
正常，你提取的质粒开环了比超螺旋的marker对比慢很多正常

但是如果开环的话不会全是开环吧，在正常的地方是不是至少有浅色条带？

发自小木虫Android客户端
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懵懂的小白
4楼2022-03-24 19:26:24
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切后再跑胶，构象对电泳结果有影响
赞一下 回复此楼
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
5楼2022-03-26 10:54:19
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