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victor1115

铜虫 (小有名气)

[交流] PAGE电泳技术求助

方法是后染法
20%PAGE，GelRed染色
每次跑电泳出来的胶
染色后在紫外灯下观察感觉比较模糊
条带不清晰，重复好多次都是这样
不知为何

有没有这方面的达人给与指教，万谢！

[ Last edited by victor1115 on 2009-9-4 at 13:26 ]
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1楼 2009-09-04 13:21:00
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小瞥

铁虫 (小有名气)
★
victor1115(金币+1,VIP+0):谢谢回复 9-4 16:07
1.是不是你的胶浓度太大，胶是否做的很好
2.时间染久了，DNA会弥散
3.最后可能是DNA的问题了。
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2楼2009-09-04 16:06:20
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victor1115

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小瞥 at 2009-9-4 16:06:
1.是不是你的胶浓度太大，胶是否做的很好
2.时间染久了，DNA会弥散
3.最后可能是DNA的问题了。

1、DNA是28个碱基，20%胶应该是合适的。做胶过程应该没有杂质，不过可能密封有点问题，制胶的过程中角上的一块会流下，这会不会造成胶版密度不均一？
2、染30min而已，染时间太短又没有
3、DNA是没有问题的，在公司定的商品DNA
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3楼2009-09-04 16:10:52
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银杏下

金虫 (小有名气)
★
victor1115(金币+1,VIP+0):谢谢 9-4 18:03
根据我利用page跑蛋白电泳的情况来看，这种胶稍微有些没混匀就会导致条带不清晰，所以我建议你充分混匀胶后再试试。
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4楼2009-09-04 17:13:03
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
victor1115(金币+1,VIP+0):谢谢 9-4 18:03
如果确定胶都没问题，考虑用较低的电压，延长电泳时间，效果可能会好一点。
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5楼2009-09-04 17:19:32
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
victor1115(金币+1,VIP+0):谢谢 9-4 18:03
胶的浓度太大，片段又太小，所以对胶的质量要求就比较高了，稍有不均匀就直接影响条带了，重新做胶试试吧。这么小的条带是不是该用很小的电压跑啊，否则也会扭曲的。
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6楼2009-09-04 17:29:32
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changes

木虫 (正式写手)
★
victor1115(金币+1,VIP+0):谢谢 9-22 14:06
引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-9-4 17:29:
胶的浓度太大，片段又太小，所以对胶的质量要求就比较高了，稍有不均匀就直接影响条带了，重新做胶试试吧。这么小的条带是不是该用很小的电压跑啊，否则也会扭曲的。

赞同，浓度确实有些高了，15%的应该也可以了。功率降低些试试。
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7楼2009-09-04 21:38:29
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