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xuannnn新虫 (正式写手)
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[求助]
大肠杆菌感受态制备
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请教各位，如何只用一管大肠杆菌感受态（100ul）制备很多新的大肠杆菌感受态？（小白从网上查到这个方法，请各位帮忙看看是否正确，或者是否有更好的方法，谢谢大家！！！） （一）受体菌的培养 (1)从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落，接种于3～5mL LB液体培养基中，37℃下振荡培养过夜（12h左右）。 (2)将该菌种悬液以1:100的比例接种，取250μL菌液转接到25mL LB液体培养基中，37℃振荡培养2～3h至OD600＝0.5左右。 （二）感受态细胞的制备（注意：以下操作在超净工作台完成。） (1)将菌液转入50mL离心管中，冰上放置10min。 (2)在4℃下，4000r/min离心10min。弃去上清，将管倒置1min以便培养液流尽。 (3)用冰上预冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液10mL轻轻悬浮细胞，冰上放置30min。 (4)0～4℃ 4000r/min离心10min，弃去上清，加入2mL预冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置（务必冰上放置）。 （注意：以上操作完成了新鲜感受态细胞的制备） （三）感受态细胞的分装与冻存 (1)在2mL制备好的感受态细胞中加入2mL30%甘油（即1:1体积，甘油终浓度15%）。 (2)将此感受态细胞分装成每份200μL (1.5mL dorf管)，液氮速冻，快速转入-70℃冰箱保存。（如果没有液氮，可以将分装的感受态细胞直接转入-70℃冰箱保存。） |
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