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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-9-3 22:23:
用pfu扩增的时候延伸的时间要长不少,因为它的扩增效率是taq的1/2。假如taq能

1min扩增1000bp的话,pfu就只有500bp了。所以你的2600bp要是延伸时间设置的

2min或者以下的话,效果可想而知。

建议使用taq ...

严重同意!
增加引物浓度,延长延伸时间等,总之要重新摸索一下条件。
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
11楼2009-09-04 19:17:41
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rural2084

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 9-5 14:53
出现过这种情况,我曾经克隆过1300的基因,taq酶能出来,pfu酶出不来,做热启动也没出来。我怀疑是dna的原因,pfu好像对dna纯度要求较高。具体什么原因,我也不太清楚。pcr就是比较神奇。
12楼2009-09-04 20:05:39
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changes

木虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 9-5 14:53
建议更换个公司的Pfu。Takara的Pfu个人感觉一般。现在用全式金的FastPfu,感觉不错,连极高GC含量的片段都能扩增出来,出乎我的想象。
13楼2009-09-04 21:50:46
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 9-5 14:53
Taq酶是目前最稳定的酶了,也是用的最广的酶其他的或多或少都有点问题,还是用Taq酶吧!
砖石王老三!!!
14楼2009-09-05 14:33:06
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