求助克隆基因扩增问题 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

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引用回帖:

Originally posted by brightfuture01 at 2009-9-3 22:23:
用pfu扩增的时候延伸的时间要长不少，因为它的扩增效率是taq的1/2。假如taq能

1min扩增1000bp的话，pfu就只有500bp了。所以你的2600bp要是延伸时间设置的

2min或者以下的话，效果可想而知。

建议使用taq ...

严重同意！
增加引物浓度，延长延伸时间等，总之要重新摸索一下条件。

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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！

11楼2009-09-04 19:17:41

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rural2084

木虫 (正式写手)

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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 9-5 14:53

出现过这种情况，我曾经克隆过1300的基因，taq酶能出来，pfu酶出不来，做热启动也没出来。我怀疑是dna的原因，pfu好像对dna纯度要求较高。具体什么原因，我也不太清楚。pcr就是比较神奇。

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12楼2009-09-04 20:05:39

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changes

木虫 (正式写手)

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建议更换个公司的Pfu。Takara的Pfu个人感觉一般。现在用全式金的FastPfu，感觉不错，连极高GC含量的片段都能扩增出来，出乎我的想象。

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13楼2009-09-04 21:50:46

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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 9-5 14:53

Taq酶是目前最稳定的酶了，也是用的最广的酶其他的或多或少都有点问题，还是用Taq酶吧！

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砖石王老三！！！

14楼2009-09-05 14:33:06

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