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chirmas0929

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[交流] 扩增病毒遇到的问题

扩增病毒遇到的问题

我现在在用293扩增已包装好的腺病毒。病毒原液滴度有点高，我100ml培养瓶，加3微升，48小时就有细胞浮起了，也有荧光表达。所以我2瓶100ml细胞收成1ml后反复冻融3次后收到-80保存（未分装）。
现在我拿我自己第一次扩增的病毒液进行第二轮扩增，同样100ml培养瓶中加入5微升第一轮病毒液，24小时候无荧光，之后我补加了10微升，48小时候有大量荧光，但不强，因此我觉得是对的，因为72小时理论上应该荧光更强些。结果今天72小时去看，6瓶细胞中3瓶浮起了，而且无荧光。另外3瓶浮起一小部分，但是也无荧光。我实在不知道是什么原因，因为我扩增这个病毒扩了好几个月了，心里十分着急，害怕毕不到业。。。不知道是不是荧光显微镜的原因，因为我中间48小时那次的观察换了个实验室的显微镜看的。可是我的实验室老师坚持说我们实验室的显微镜没问题（即我24小时和72小时观察用的显微镜），因为其他同学观察到的荧光的确是很好，很正常的。
麻烦各位高手为我解答一下我的困惑，万分感谢。

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