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【求助】有没有人做过人脂肪细胞分离的
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我马上要开始做实验，手术取脂肪组织，我想先对脂肪组织做一下免疫组化，再从脂肪组织中分离出成熟的脂肪细胞，提RNA，RT-PCR。（我不想直接提脂肪组织中的，因为脂肪组织中有脂肪细胞，也有前脂肪细胞、巨噬细胞等，我想测的是这个因子在脂肪细胞中高表达的情况）。问题是： 1.我取的手术标本时间跨度比较大，应该怎样保存？液氮或-80度冰箱冷冻，会不会影响细胞活性，影响后续的免疫组化和提细胞的RNA？如果影响，应该怎么做？ 2.成熟的脂肪细胞分离后要立即提RNA吗？能不能加trizol冻-80，以后再提RNA？ 3.关于脂肪细胞分离据说难度很大，国外有人做过，不知各位有没有人做过，可行性如何？ 因为是新手，问的比较多，望各位老师不吝赐教，十分感谢！ |
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