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能怎样

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有1人参与

昆虫表达二聚体,WB可检测到,纯化不出来是什么原因呢?

@hc-material 发自小木虫IOS客户端
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heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先,我不知道你的蛋白是分泌的,还是胞内的。

其次如果是胞内的,你需要看一下是不是可溶表达的。最好用超速离心分离裂解液的上清和沉淀,分别做WB。

最后WB的检测较灵敏,在ng级别,如果表达量过少,使用原材料过少,是不是都会富集不到?

最后纯化方式是什么?Ni柱纯化丰度较低蛋白,特异性较差,可能观察不到目标蛋白条带。。。可以通过WB考察Ni柱纯化前后,Ni柱洗脱液的信号情况,观察蛋白是否都挂柱了,是否在洗脱液中被富集了。来判断纯化方式是否有效

以上是经验之谈
2楼2022-05-16 16:10:57
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