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能怎样

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有1人参与

昆虫表达二聚体，WB可检测到，纯化不出来是什么原因呢？

@hc-material 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2022-03-07 10:30:42
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heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先，我不知道你的蛋白是分泌的，还是胞内的。

其次如果是胞内的，你需要看一下是不是可溶表达的。最好用超速离心分离裂解液的上清和沉淀，分别做WB。

最后WB的检测较灵敏，在ng级别，如果表达量过少，使用原材料过少，是不是都会富集不到？

最后纯化方式是什么？Ni柱纯化丰度较低蛋白，特异性较差，可能观察不到目标蛋白条带。。。可以通过WB考察Ni柱纯化前后，Ni柱洗脱液的信号情况，观察蛋白是否都挂柱了，是否在洗脱液中被富集了。来判断纯化方式是否有效

以上是经验之谈
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2楼2022-05-16 16:10:57
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