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小小虫！！

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于原核表达目的蛋白分子量变大的问题求助

各位大神，我最近投了一篇杂志，审稿人提了一个问题，我的蛋白预测是35kDa,但是实际跑出来的大小时52kDa,预测显示这个蛋白具有糖基化以及磷酸化位点，所以我的解释就是可能发生了糖基化或磷酸化修饰。审稿人觉得在大肠杆菌系统中变化这么大这种解释不足以让他信服，让我提出更加充分的解释，所以想请教一下各位大神，还有啥可能导致实际蛋白分子量变大，拜托拜托@Monash2011
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1楼 2022-03-06 17:18:59
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longwen8

木虫 (文坛精英)
你采用什么方法预测的，确定预测的是准确的？再用质谱测测。

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2楼2022-03-06 17:21:03
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A芒狗

新虫 (初入文坛)
你加上了载体的大小了？

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3楼2022-03-06 17:21:18
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小小虫！！

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longwen8 at 2022-03-06 17:21:03
你采用什么方法预测的，确定预测的是准确的？再用质谱测测。

就是网上的在线预测的网站，用的是特异性的单抗进行WB检测的目的条带
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4楼2022-03-06 17:23:43
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小小虫！！

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by A芒狗 at 2022-03-06 17:21:18
你加上了载体的大小了？

我用的是单抗进行WB检测的，应该没法加上载体吧
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5楼2022-03-06 17:24:59
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longwen8

木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小虫！！ at 2022-03-06 17:23:43
就是网上的在线预测的网站，用的是特异性的单抗进行WB检测的目的条带...

WB只是建立在DNA序列正确基础上检测蛋白表达的一种手段，其结果不能单方面作为鉴定结果的判断。

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6楼2022-03-06 17:39:51
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小小虫！！

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by longwen8 at 2022-03-06 17:39:51
WB只是建立在DNA序列正确基础上检测蛋白表达的一种手段，其结果不能单方面作为鉴定结果的判断。
...

测过序，序列是对的
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7楼2022-03-06 17:41:27
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匿名

本帖仅楼主可见
8楼2022-03-06 18:01:09
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桃子YAO_

新虫 (初入文坛)
您好，请问您解决了这个问题吗，最近我也有原核表达诱导的 蛋白大小是实际的2倍，是形成多聚体了吗？跑胶时加了β-巯基乙醇
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9楼2023-07-06 17:01:28
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YU_DG

木虫 (正式写手)
原核表达不容易加上这些修饰吧，您用的什么载体

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10楼2023-08-22 11:47:00
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