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孙丫头

金虫 (初入文坛)

[交流] pcr到底要不要加镁离子,纠结

最近在做pcr,试剂中有taqman酶,buffer,mg离子。buffer里不含镁。前几次做忘记加镁离子,结果都跑出目的条带来了,之后想起来,就加了镁离子,结果pcr后没有条带。今天又同步做了两管,一管加镁,一管不加,结果不加的那一管条带很亮,加的很暗。
现在很纠结,为什么呢?请教高手。

[ Last edited by amisking on 2009-9-2 at 16:59 ]
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



孙丫头(金币+1,VIP+0):谢谢 9-3 10:12
宝生物的Buffer你已经有Mg了。
9楼2009-09-02 19:42:31
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查看全部 13 个回答

kongxiangshi

金虫 (小有名气)

Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用 并能影响Polymerase的活性,一般的情况下 Mg的浓度在0.5-5mM之间调整,同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度
Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
2楼2009-09-02 16:53:46
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sonyk

木虫 (小有名气)

不加镁离子也能P出来,太强悍了!buffer是不是有问题啊,换新的吧。
3楼2009-09-02 16:54:28
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rural2084

木虫 (正式写手)

确实是,不加镁离子,都能出来。分子确实太难以琢磨。
4楼2009-09-02 16:56:42
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