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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pcr到底要不要加镁离子，纠结
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孙丫头

金虫 (初入文坛)

[交流] pcr到底要不要加镁离子，纠结

最近在做pcr，试剂中有taqman酶，buffer，mg离子。buffer里不含镁。前几次做忘记加镁离子，结果都跑出目的条带来了，之后想起来，就加了镁离子，结果pcr后没有条带。今天又同步做了两管，一管加镁，一管不加，结果不加的那一管条带很亮，加的很暗。
现在很纠结，为什么呢？请教高手。

[ Last edited by amisking on 2009-9-2 at 16:59 ]
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1楼 2009-09-02 16:36:23
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
如果buffer里本来就有Mg了，再加肯定影响PCR结果啦
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7楼2009-09-02 17:39:20
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kongxiangshi

金虫 (小有名气)
Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用 并能影响Polymerase的活性，一般的情况下 Mg的浓度在0.5-5mM之间调整，同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度
Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
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2楼2009-09-02 16:53:46
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sonyk

木虫 (小有名气)
不加镁离子也能P出来，太强悍了！buffer是不是有问题啊，换新的吧。
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3楼2009-09-02 16:54:28
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rural2084

木虫 (正式写手)
确实是，不加镁离子，都能出来。分子确实太难以琢磨。
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4楼2009-09-02 16:56:42
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