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zzq770204

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 66金币求助:采用什么方法筛选新基因比较好?

刚毕业就更换研究方向,对分子生物学了解很少,请问采用什么方法筛选新基因比较好,SSH法本实验室已经在用,老师要求换个方法,所以很迷惑,初步设想用SAGE或基因文库,请高手指点下.
如能够提供操作方法将不胜感激!
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ahui1883

金虫 (小有名气)

呵呵  友情顶贴 本人也不懂
海阔凭鱼跃,天高任鸟飞。
2楼2009-09-02 11:02:03
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zzq770204(金币+16,VIP+0):谢谢!我们不差钱,就是我搞不清楚怎么做,请问还有其它合适的方法么? 9-2 16:10
zzq770204(金币+6,VIP+0):麻烦告诉下文库的基本操作流程,谢谢!zzq770204@163.com 9-11 11:56
嘿嘿,我在做文库,不过已经筛出东西了。如果实验室自动化程度比较低的话,经费

少的话,就不要采用基因文库。这个方法工作量不是一般大,最后能不能晒出来还另

说。在经费少的实验室,老板要是选择了这个课题,那就是当你做廉价劳动工具了。

祝好运
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2009-09-02 11:07:51
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bioman9810

木虫 (著名写手)

千娇百媚是哥的妞儿

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-9-2 11:07:
嘿嘿,我在做文库,不过已经筛出东西了。如果实验室自动化程度比较低的话,经费

少的话,就不要采用基因文库。这个方法工作量不是一般大,最后能不能晒出来还另

说。在经费少的实验室,老板要是选择了这个课 ...

来跟学友哥学习
头搭毛巾也掩盖不住哥耀眼的光芒,哥一直帅的很低调,仰角45°深深陶醉中....
4楼2009-09-02 11:14:42
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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文献杰出贡献

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zzq770204(金币+10,VIP+0):谢谢! 9-3 08:05
我看你的方向上写的是    油菜育种,而我的专业是微生物。植物和微生物的一大不同

在于植物的DNA中有内含子。倒是真核生物方面有文献报道可以用 兼并引物PCR 然

后 使用genome   walking 、IPCR、hiTai PCR 等扩增基因侧翼序列的方法获得基因全

长的先例。肯定没有原核生物方便的,但是也可以一试,周期短。

假如你真想做 基因文库的话 植物需要建 Cosmid 库 或者 BAC TAC库的,得挑的单克

隆非常大,后期的筛选还要有比较方便的检测手段。比如淀粉酶有水解圈啊之类的肉

眼可见的特征。用杂交的方式也可以,不过这也是基于序列的筛选。

要做 建库 工作的话,你们那边要有  机械手,挑取单克隆之用;脉冲场凝胶电泳仪

;随后筛选的时候策略不同用到的东西也不同。所以说工作量非常大。其中的细节非

常重要。我们这边有人做这个工作,看起来非常痛苦。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-09-02 17:03:16
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rural2084

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zzq770204(金币+10,VIP+0):谢谢! 9-3 08:06
zzq770204(金币+6,VIP+0):麻烦告诉下文库的基本操作流程,谢谢!zzq770204@163.com 9-11 11:57
楼主你好,能说具体一点吗,不知道你想筛选什么样的新基因。

筛选新基因最好有明确的目标,比如肯定是要确定基因的功能和名称。

确定了基因的功能和名称后,就要尽量多的查资料,掌握目前已经发现的具有该功能的基因及物种。
这样就能够为找与这些基因差异大而且功能相同的基因提供参考了。

最后是确定你要寻找新基因的物种,如果该物种具有你要的功能,而且目前没有人研究过该物种的这种基因,那么其是新基因的可能性就大了。

最后就是通过文库方法获得新基因。现在获得新基因最常用的方法就是文库法。

但是文库法比较繁琐,因此最好是能够确定你所构建的文库里有新基因,如果通过文库方法弄出来的不是新基因就郁闷了,前面那么多的资料准备就是为了确认其含有新基因。

[ Last edited by rural2084 on 2009-9-2 at 17:10 ]
6楼2009-09-02 17:09:18
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zzq770204

至尊木虫 (著名写手)

控制油酸含量的基因,我想用SAGE法,你们觉得如何?

[ Last edited by zzq770204 on 2009-9-3 at 08:05 ]
7楼2009-09-03 08:03:57
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hndc123

专家顾问 (著名写手)

来悄悄....
8楼2009-09-03 08:57:25
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

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zzq770204(金币+10,VIP+0): 9-3 11:08
引用回帖:
Originally posted by zzq770204 at 2009-9-3 08:03:
控制油酸含量的基因,我想用SAGE法,你们觉得如何?

[ Last edited by zzq770204 on 2009-9-3 at 08:05 ]

恩,可以试试。这个不适合构建文库。否则你的每个单克隆都得做一个底物反

应,测油酸的起始量和最终量。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
9楼2009-09-03 09:35:42
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xuezhen

银虫 (小有名气)


zzq770204(金币+1,VIP+0): 9-11 11:57
学习一下,我也开始做,很多不懂!
10楼2009-09-03 09:55:00
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