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66金币求助:采用什么方法筛选新基因比较好?
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刚毕业就更换研究方向,对分子生物学了解很少,请问采用什么方法筛选新基因比较好,SSH法本实验室已经在用,老师要求换个方法,所以很迷惑,初步设想用SAGE或基因文库,请高手指点下. 如能够提供操作方法将不胜感激! |
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ahui1883
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2楼2009-09-02 11:02:03
brightfuture01
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zzq770204(金币+16,VIP+0):谢谢!我们不差钱,就是我搞不清楚怎么做,请问还有其它合适的方法么? 9-2 16:10
zzq770204(金币+6,VIP+0):麻烦告诉下文库的基本操作流程，谢谢！zzq770204@163.com 9-11 11:56
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zzq770204(金币+6,VIP+0):麻烦告诉下文库的基本操作流程，谢谢！zzq770204@163.com 9-11 11:56
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嘿嘿，我在做文库，不过已经筛出东西了。如果实验室自动化程度比较低的话，经费 少的话，就不要采用基因文库。这个方法工作量不是一般大，最后能不能晒出来还另 说。在经费少的实验室，老板要是选择了这个课题，那就是当你做廉价劳动工具了。 祝好运 |
3楼2009-09-02 11:07:51
bioman9810
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4楼2009-09-02 11:14:42
brightfuture01
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zzq770204(金币+10,VIP+0):谢谢! 9-3 08:05
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我看你的方向上写的是 油菜育种，而我的专业是微生物。植物和微生物的一大不同 在于植物的DNA中有内含子。倒是真核生物方面有文献报道可以用 兼并引物PCR 然 后 使用genome walking 、IPCR、hiTai PCR 等扩增基因侧翼序列的方法获得基因全 长的先例。肯定没有原核生物方便的，但是也可以一试，周期短。 假如你真想做 基因文库的话 植物需要建 Cosmid 库 或者 BAC TAC库的，得挑的单克 隆非常大，后期的筛选还要有比较方便的检测手段。比如淀粉酶有水解圈啊之类的肉 眼可见的特征。用杂交的方式也可以，不过这也是基于序列的筛选。 要做 建库 工作的话，你们那边要有 机械手，挑取单克隆之用；脉冲场凝胶电泳仪 ；随后筛选的时候策略不同用到的东西也不同。所以说工作量非常大。其中的细节非 常重要。我们这边有人做这个工作，看起来非常痛苦。 |
5楼2009-09-02 17:03:16
rural2084
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楼主你好，能说具体一点吗，不知道你想筛选什么样的新基因。 筛选新基因最好有明确的目标，比如肯定是要确定基因的功能和名称。 确定了基因的功能和名称后，就要尽量多的查资料，掌握目前已经发现的具有该功能的基因及物种。 这样就能够为找与这些基因差异大而且功能相同的基因提供参考了。 最后是确定你要寻找新基因的物种，如果该物种具有你要的功能，而且目前没有人研究过该物种的这种基因，那么其是新基因的可能性就大了。 最后就是通过文库方法获得新基因。现在获得新基因最常用的方法就是文库法。 但是文库法比较繁琐，因此最好是能够确定你所构建的文库里有新基因，如果通过文库方法弄出来的不是新基因就郁闷了，前面那么多的资料准备就是为了确认其含有新基因。 [ Last edited by rural2084 on 2009-9-2 at 17:10 ] |
6楼2009-09-02 17:09:18
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brightfuture01
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