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【求助】噬菌体肽库筛选ELISA阴性对照该怎么做呢？急！！！
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RT，做的是十二肽肽库的筛选.挑完斑扩增之后滴度大概是3*10的9次方。 ELISA中从每孔3*10的10次方个病毒子开始四倍梯度稀释，每个单斑做六个孔。 ELISA顺序是目的蛋白（100ug/ml）——BSA封闭--噬菌体——抗M13抗体（1：1000稀释）——HRP羊抗鼠(1:2500)——TMB显色。有空白对照，什么都不加；有BSA封闭直接加一抗二抗；最后一种对照出问题了，就是只是不包被目的蛋白，加噬菌体然后其他都和实验组的孔一样，就在实验组的下面同时做一排，其实我的目的是为了去除BSA干扰。 结果相当惨，实验组OD450大概都是0.2-0.3左右，不加包被目的蛋白的对照几乎和实验组差不多，大概实验组是0.2，对照就是0.18这样，差距很小，难道筛了四轮之后筛出一堆和BSA作用的噬菌体？做过的大大指点一下吧！大家的阴性对照是怎么做的呢？万分感激！ |
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| 你好，我也在做这样的实验，但是还是刚开始，能相互联系么，我的邮箱是：mobei_hu@126.com. 我使用的是单链抗体库，辅助噬菌体用KM13。我获得的概念是筛选尽量不要超过3轮，因每轮选出的噬菌体里面有虽然外壳蛋白上有你要的蛋白，但是基因可能是辅助噬菌体，可能辅助噬菌体更容易生长，有可能最后挤掉了你所要的基因，尽管开始有你选择的蛋白，到最后可能就不再有该蛋白表达。我还没做到你那步，所以不一定准确。你能否每筛选一次就做一次ELISA，如果第一次有结果，后面就继续筛选。 |
2楼2009-09-01 18:13:52
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