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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)

[交流] 有关质粒提取后的电泳问题

我的实验过程是这样的,从菌A中提取质粒,然后电转化到菌B中,涂板,挑单菌落培养,提质粒验证是否转化成功。质粒是用试剂盒提取的。然后电泳,顺带也把电转前的质粒电泳,结果发现质粒条带差别很大,这样会不会是染菌了?是否需要再酶切验证?因为最近做的实验涉及到几株不同的菌和质粒,怕是平板之间有污染。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-1 at 20:20 ]
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695

木虫 (职业作家)


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一切皆有可能,做下酶切和PCR验证后再看情况吧
2楼2009-08-31 03:48:38
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

估计没问题,验证也好
3楼2009-08-31 06:30:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

单酶切后再跑
4楼2009-08-31 07:51:59
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jessica533

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
污染的可能性比较大,做一下鉴定吧
把忧愁微掉,将快乐积起。
5楼2009-08-31 14:35:11
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zhouhuaxi

铜虫 (正式写手)

酶切有必要,然后PCR也是一个不错的办法。至于提取质粒条带差异可以接受吧,三个不同的构象助质粒之间是有一定的差异的
6楼2009-08-31 16:16:02
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最好鉴定下,一般都是一样的。。。如果 条带大小差异大肯定是有问题了。
我以前也遇到过,明明是8KB的质粒,提取出来只有3KB大小,猜测是污染了PUC18之类 的质粒。
7楼2009-08-31 16:24:03
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yanfeier

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切一下看下结果  ,但同时可以体系鉴定一下的吧。
8楼2009-09-01 17:32:26
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吟啸徐行

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切和PCR鉴定后再说对不对
9楼2009-09-01 19:17:50
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115425192

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
根据质粒图谱找个单一的酶切位点进行酶切,这样就没有3种构象的干扰,基本可以准确的判断质粒大小。
10楼2009-09-01 20:03:23
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