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stefa

新虫 (小有名气)

[交流] 求助:PGEX载体宿主的选择

RT   我最近用PGEX转化入DH5α中
跑电泳结果显示,加不加IPTG好像都有目的蛋白的条带
于是我不感肯定这个是不是目的蛋白

我看了些资料有些疑惑 是不是DH5α这个菌不产生lac I的阻遏蛋白
导致IPTG没有效果
但是我又发现PGEX上本身就有Lac I(q)的基因,它自己就应该能产生这个阻遏蛋白的吧,现在很困惑,希望有懂的同学来解释下。谢谢!
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stefa

新虫 (小有名气)

怎么没人给点意见啊
2楼2009-08-30 18:31:19
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
DH5α不适合做表达菌吧!只能用于克隆,不能用于表达。要表达蛋白有专门的表达菌株
一个人可以不成功,但不可以不成长!
3楼2009-08-30 19:10:28
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子

换菌株吧。
生命的海洋里,我是蓝色的一滴
4楼2009-08-30 20:39:58
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我用BL21表达pGEX载体效果很好
5楼2009-08-30 20:41:17
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
表达我们用农杆菌gv3101
6楼2009-08-30 21:15:06
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lipishun

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用BL21 Rotase,
有些时候没有加诱导剂也表达
可以尝试小量纯化一下
看是不是你的蛋白
7楼2009-08-30 21:19:29
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qdwmq

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我用DH5α表达过pGEX没问题
但正规做法要用BL21
8楼2009-08-31 00:10:43
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银杏下

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这不是lacI的问题,DH5a不能作为表达菌株是因为它没有T7RNA聚合酶的基因,所以不能启动T7启动子,所以当然也就不表达了。可以使用BL21等表达菌株进行表达。
9楼2009-08-31 08:36:53
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恒星年

银虫 (正式写手)

最好的是BL21吧
10楼2009-08-31 08:48:20
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