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huainianshili金虫 (正式写手)
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[交流]
对于一个大肠杆菌中的质粒，哪些元件是必须的？
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我想用pet28a为基础构建一个新的质粒。 看了一下公司给出的图谱，发现上面主要就有5个元件：col E1 pBR322 origin; Kanr; F1 origin; 多克隆微点；lac I。 我觉得我构建的新质粒只要有前两个元件就可以复制和筛选了，因为另外3个元件不是必需的。 但另一方面如果pet28 复制所需要的酶是他自身编码的话。我的新质粒只有origin 没有相应的酶也复制不了。 所以如果我只是把pet的col E1 pBR322 origin和Kanr扩增出来然后和我其他的片段相连，构建成一个新质粒。这样可不可行？ 请大家讨论一下。 |
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xiangao
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2楼2009-08-29 20:52:33
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huainianshili(金币+8,VIP+0): 8-31 22:01
huainianshili(金币+8,VIP+0): 8-31 22:01
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对于一个质粒，理论最少只需要origin就可以了 但为了克隆的需要 加个抗性基因也是必要的 所以我认为楼主的想法应该是可以的 但是记得保留kanR的启动子和SD序列 否则都无法表达KANR 就不能筛选了 还有不知道大肠杆菌内质粒复制的时候是否需要复制的相关蛋白？ 我用过其他宿主菌的质粒,有些质粒除了origin起始位点外， 还需要某些复制蛋白才能在宿主菌内复制，你最好再仔细检查下PET28的序列！ 当然，简化的质粒当然会失去原来的一些功能。具体设计你还得好好考虑 [ Last edited by houjinglhy on 2009-8-29 at 21:00 ] |
3楼2009-08-29 20:59:17
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4楼2009-08-29 23:22:13
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5楼2009-08-30 10:32:56