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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做PCR电泳时加loading buffer 的作用是什么？
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小桥流水5596

木虫 (小有名气)

[交流] 做PCR电泳时加loading buffer 的作用是什么？

做PCR电泳时加loading buffer 的作用是什么？
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1楼 2009-08-29 19:39:41
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spiderboy

金虫 (正式写手)
★ ★
生命核心(金币+2,VIP+0):鼓励交流！ 10-7 21:58
两个作用：
1、里边的成分甘油帮助样品沉降入点样孔中，防止样品到处漂
2、里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，溴酚蓝条带的位置差不多相当于20bpDNA片段，二甲苯酚条带的位置相当于2KbpDNA片段。。。跑在最前面的是溴酚蓝。。。
另外，有的BUFFER是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。
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2楼2009-08-29 19:46:55
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4021435281516

木虫 (小有名气)
★
小桥流水5596(金币+1,VIP+0):谢谢！ 9-1 20:51
loading buffer的作用不仅仅是有染色，loading buffer的成分往往还有甘油或者蔗糖这是最关键的一点是要将你的样的密度加大，只有加大密度才能在你点样的时候，使得你的样品比TAE的密度大，从而沉的点样孔里边。所以你的问题就可以解释了，如果是6X的，那么应该是5ul的样+1ul的loading buffer，如果你加少了，那么很可能你的样品就不能很好的沉到点样孔中。 这样很明显，可能跑到胶里边的样和你点进去的样的量是不同的，很有可能有一部分样漂出了点样孔
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3楼2009-09-01 18:03:36
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cato8163

银虫 (正式写手)
二楼就说的好。
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4楼2009-09-01 20:03:19
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goonhetty

木虫 (小有名气)
看来我每次加的有点少了！！
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5楼2009-09-01 20:43:42
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caicaiyy

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢交流，简洁的答案！ 10-7 21:59
loading buffer也叫指示剂，成分是蔗糖和溴酚蓝，蔗糖的作用是使混合液沉在孔中，不会漂起来，溴酚蓝起指示作用，观察电泳跑到哪个位置了。
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6楼2009-10-07 21:33:47
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小桥流水5596 at 2009-8-29 19:39:
做PCR电泳时加loading buffer 的作用是什么？

就是沉降和指示作用了
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7楼2009-10-07 22:39:57
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xwei03212

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以干点，先用缓冲液点冲点样空，在将样品混合loading  buffer,点样，移胶，电泳。
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8楼2009-10-07 23:24:21
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
顶二楼！好回复
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9楼2009-10-08 10:13:22
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