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yzukxx

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[求助] 30kda的真核基因做原核表达。已有1人参与

1.信号肽是否需要去除？
2.纯化后的蛋白是否需要去除48kda的载体蛋白和1kda不到的his标签。
3.如果构建载体时碱基移码突变，菌株会不会表达移码后的蛋白。
4.我要表达的蛋白本身是一个具有10kda左右分子量的N-糖基化修饰的蛋白，原核表达的蛋白没有糖基化修饰是否会导致失去原蛋白的所有功能。

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1楼 2022-02-12 23:01:59

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fuyuandj86

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己所不欲，勿施于人

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
yzukxx: 金币+20, ★★★很有帮助 2022-02-19 18:41:24

1. 去除信号肽的比较多，但也有不去除就做的
2. his标签偶尔去除，大部分情况都不留着不管；48 kDa载体蛋白是什么？
3. 移码不会表达
4. 原核表达没有翻译后修饰

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yzukxx

The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

2楼2022-02-13 08:48:15

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yzukxx

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2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2022-02-13 08:48:15
1. 去除信号肽的比较多，但也有不去除就做的
2. his标签偶尔去除，大部分情况都不留着不管；48 kDa载体蛋白是什么？
3. 移码不会表达
4. 原核表达没有翻译后修饰

空载pclod质粒也会翻译蛋白，约48kd，也就是说我的蛋白分子量为30kd的基因构到载体上，最后纯化出来的蛋白约为80kda

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3楼2022-02-14 22:17:02

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