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crystal8595银虫 (初入文坛)
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[交流]
抗菌肽 分离纯化 苦恼中...
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我是做一种抗菌肽的酵母重组表达，分子量是7kDa，等电点11点多，好不容易表达出来了，老板又让继续往下分离纯化。前一个月用CM 阳离子柱分的，效果挺好的，只出现了一个单峰。为了除去分子量大的干扰蛋白，接着又用10kDa的超滤膜分了一次，后来跑电泳没有发现条带，活性也不明显，我怀疑是纯化的过程中目标蛋白纯化没了，活性也丧失了。 现在再打算换种方法，还是用CM 阳离子柱分，想用醋酸铵做缓冲液，这样可以直接冻干除去醋酸铵，但是洗脱液该选用什么呢？用NaCl洗脱的话，岂不是又带入了盐离子？ 还有是先超滤掉大分子的蛋白再分离呢，还是直接先用离子交换再超滤呢？ 小女子先谢谢各位大侠啦~ [ Last edited by 350784478 on 2009-9-4 at 10:04 ] |
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