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crystal8595

银虫 (初入文坛)

[交流] 抗菌肽 分离纯化 苦恼中...

我是做一种抗菌肽的酵母重组表达,分子量是7kDa,等电点11点多,好不容易表达出来了,老板又让继续往下分离纯化。前一个月用CM 阳离子柱分的,效果挺好的,只出现了一个单峰。为了除去分子量大的干扰蛋白,接着又用10kDa的超滤膜分了一次,后来跑电泳没有发现条带,活性也不明显,我怀疑是纯化的过程中目标蛋白纯化没了,活性也丧失了。
现在再打算换种方法,还是用CM 阳离子柱分,想用醋酸铵做缓冲液,这样可以直接冻干除去醋酸铵,但是洗脱液该选用什么呢?用NaCl洗脱的话,岂不是又带入了盐离子?
还有是先超滤掉大分子的蛋白再分离呢,还是直接先用离子交换再超滤呢?

小女子先谢谢各位大侠啦~

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-4 at 10:04 ]
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这么碱的肽,为何不合理利用其pH做文章呢?利用好等点电应该就可以除去好多杂蛋

白。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-28 16:04:10
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crystal8595

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-8-28 16:04:
这么碱的肽,为何不合理利用其pH做文章呢?利用好等点电应该就可以除去好多杂蛋

白。

等电点? 我曾经用过SP 柱分离,但用1M NaCL 线性洗脱都没有信号出现,所以才用弱的CM 分离的
您说的利用pH 还有什么方法呢?
3楼2009-08-28 16:15:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

等电点沉淀和变性沉淀

[ Last edited by lxj341401 on 2009-8-28 at 16:43 ]
4楼2009-08-28 16:42:34
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