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专业: 细胞生物学研究中的新方法

[交流] 细胞外囊泡分离纯化方法有哪些？如何选择？已有1人参与

话不多说，这一期介绍一下细胞外囊泡的分离纯化的方法，要怎么去选择。

目前市面上有很多纯化EV的方法，比如这些比较常用的，像UC也就是差速离心，目前是金标准；还有一些商品化试剂盒，像Exoquick，还有TEI外泌体分离试剂盒，是基于聚合物沉淀的方法，还有qEV，这种基于尺寸排阻的方法，还有超滤(UF)，还有另外一种Exoeasy膜亲和吸附的方法。

这里推荐一篇厦门大学田野博士的文章，他对这几种方法纯化的EV进行了粒径、浓度、纯度等方面的评估。首先对它们纯化的EV的粒径浓度和形态进行表征，通过电镜可以看到只有UC分离的样本有典型的茶托状的EV形态，其他方法得到的更多的是蛋白样的颗粒；浓度方面UC得到的浓度最低，基本是少了2-4个数量级，其他方法得到的浓度都跟PFP也就是去除血小板的血浆的浓度比较接近，而且可以看到UC得到的粒径分布相对比较宽。那其他这些试剂盒的方法得到高浓度的样本，里面到底有多少EV呢？其实通过电镜可以大概猜到里面可能大部分还是蛋白颗粒。

所以接下来进一步对纯度进行评估，这里是用Triton x-100这种表面活性剂对EV进行裂解处理，然后对比裂解前后颗粒浓度，处理之后还存在的颗粒就是一些不能被裂解的蛋白。可以看到UC处理后颗粒数有明显的降低，计算得到的纯度是有80%左右，而其他方法得到的纯度都比较低。而且用这种评估方法还发现其实用Exoeasy分离得到的EV会出现一部分团聚的现象。

还有这篇是约翰霍普金斯大学医学院的董梁博士的文章，是选取了细胞上清、尿液和血浆三种典型的样本作为EV的来源，然后也是详细对比了几种常用的纯化方法，还通过对EV的传统标志物进行标记，看它们的表达情况，最后综合评估它们的纯化效果。

文章最后还基于样本类型和下游应用，给分离纯化方法的选择上提供了切实可行的参考建议。如果觉得有用的话，可以参考一下这篇文章的建议，希望可以对你样本的处理上提供一些帮助。

对于EV的分离纯化方法的选择就介绍到这里，如果你有疑问，欢迎私信给我，一起交流。