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hyy3429

新虫 (初入文坛)

[交流] VEGFR-2 western求助! 已有1人参与

最近一个多月一直在跑huvec的vegfr-2蛋白,尝试了很多条件,但是在230kda目标区域一直没有信号较强的目标蛋白出现,总是在75-100之间有明显条带,请问大家有跑过这个蛋白的吗~以下是我的跑蛋白条件:
sds-page,8% ,4-12%预制胶,4-20%都试过,sds-page时间 100V 90min
转膜为湿转,尝试过220mA 160min,240mA 150min,70V 150min,250 mA 120min
转膜液甲醇浓度20%,10%,5%都试过
封闭液尝试过碧云天,5%bsa,5%脱脂奶粉
一抗试过proteintech、CST,4度过夜
二抗室温2小时,ECL显影
请问问题出在哪里呢?很多文献中用的是原代huvec细胞,我用的是可以一直传代的huvec,是这个原因吗?

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chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这是VEGFR-2抗体的sci报道综述,你可以直接查你买的抗体货号,点击第一列货号可以查看相应的sci报道文献,建议参考文献中的实验条件和结果。​
https://www.labome.com/review/gene/human/VEGFR-2-antibody.html
2楼2022-01-19 10:08:22
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hyy3429

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chaosyw at 2022-01-19 10:08:22
这是VEGFR-2抗体的sci报道综述,你可以直接查你买的抗体货号,点击第一列货号可以查看相应的sci报道文献,建议参考文献中的实验条件和结果。​
https://www.labome.com/review/gene/human/VEGFR-2-antibody.h ...

谢谢!
3楼2022-07-08 13:56:01
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