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细胞骨架染色神器——鬼笔环肽!
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鬼笔环肽（又称鬼笔鹅膏素）是从毒蕈类鬼笔鹅膏中得到的有毒环状七肽，能选择性的与动植物体内的肌动蛋白结合，其作用与细胞松弛素Ｂ恰好相反，只与聚合的微丝结合，而不与肌动蛋白单体分子结合，使鬼笔环肽染色成为研究细胞内肌动蛋白微丝的有力工具，是细胞骨架的染色神器。光学显微镜下, 荧光标记过的鬼笔环肽可以清晰地显示出细胞内微丝的形态和分布，已广泛应用于生物医学研究中。 染色 · 步骤 此处以MG-63细胞爬片为例简述鬼笔环肽染色步骤： 将MG-63细胞接种在放置玻片的培养基中，37℃、5%CO2恒温培养箱中进行培养； 细胞培养至80-90%满时，用37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次； 使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10min； 室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min； 室温条件下，用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min； 室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min； 取200μL配制好的罗丹明标记鬼笔环肽工作液，覆盖住盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min； 用PBS清洗盖玻片3次，每次5min； 使用200μL DAPI溶液（浓度：100 nM）对细胞核进行复染，约30s； 共聚焦显微镜或荧光显微镜下观察采集图像。 鬼笔环肽无法穿越细胞膜， 不能直接应用于活细胞的染色。 |
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