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【实验步骤】石蜡切片HE染色
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1.组织包埋 (1)乙醇脱水:组织经不同浓度的乙醇溶液进行逐级脱水70%80%90%95%100%100%，各级乙醇40min(注意:骨性及钙化组织需在JYBL-Ⅱ脱钙液中浸泡24h，待组织软化后再进行乙醇脱水步骤); (2)透明:组织依次浸泡于三个二甲苯中，每缸各1h; (3)漫蜡:组织依次漫泡于三个石蜡缸中，每缸各1h; (4)包埋:将液态的石蜡倒入模具盒中，再将浸好蜡的组织块平放底部，注意切面方向朝下放置，待石蜡凝固后去掉包埋框，完全冷却变硬后再修整蜡块，组织外围的石蜡保留适中以便切片。 2.切片制作 将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向，刀的倾斜度通常15℃，转动轮转推进器，调节切片厚度为4um，切成厚度均匀的切片。左手持毛笔，右手旋动切片机转把，切片带出来之后用毛笔轻轻托起，再用镊子轻镊蜡片，以正面放入展片箱中，其水温45℃左右。待摊平整后捞片。贴附切片左手持载玻片之一端，垂直入水去附贴切片，右手用镊子辅助推动，附贴至玻片上的三分之二处。切片贴附后，放在空气中稍晾干，放置65℃烤片机上烤1h，再放置烘箱内烘烤2h。 3.石蜡切片脱蜡至水 依次将石蜡切片放入二甲苯I10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-无水乙醇I5min-无水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脱蜡。 4.HE染色 石蜡切片入苏木素染0.5-1分钟min，自来水漂洗，1%盐酸酒精分化数秒，自来水漂洗，然后1%氨水水溶液返蓝1min流水冲洗数秒放入伊红染液中染色数秒，流水漂洗。 5.脱水封片 石蜡切片依次放入75%乙醇2min-85%乙醇2min-无水乙醇5min-无水乙醇5min-二甲苯5min透明，将切片从二甲苯拿出来中性树胶封片。 6.结果判读. 细胞核为蓝色，细胞质为红色 |
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