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Lea__新虫 (著名写手)
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金黄葡萄球菌及枯草芽孢杆菌感受态细胞制备及质粒转化已有2人参与
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最近一直往金葡和枯草里导入质粒进行下一步实验，用的是ATCC6538和ATCC6633，RP4 plasmid。是不是野生型的这两种阳性菌无法形成感受态？还是宿主是阴性菌的大质粒RP4无法进入阳性菌？查了一些感受态制备方法都试过了，还是无法导入质粒。 是否用金葡RN4220和枯草WB600支撑感受态细胞的效果会更好一些？有没有虫友推荐一些易于制备感受态细胞的这两种菌？我们可以交换或者购买都行～ 还是RP4本身无法在阳性菌中存在，需要其他质粒载体或者穿梭质粒？比如pC194等？想请教下大佬们做阳性菌的转化的大多用哪种质粒比较容易转进去？我们需要质粒上带有抗生素耐药基因即可。之前一直做的是阴性菌..感觉有很多细节还不十分清楚，希望得到大神们的指点，还请不吝赐教！感激不尽！  |
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Lea__
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8楼2022-08-03 00:29:07
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【答案】应助回帖
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| 普通大肠杆菌如DH5α扩增的质粒是无法经过电转化或者化学转化进题主所述的金黄色葡萄球菌中的，需要经过相应菌株甲基化修饰的质粒才可以，如大肠杆菌DC10B或者金黄色葡萄球菌RN4220。也可以通过噬菌体转导的方式进行。 |
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Lea__
3楼2021-12-10 09:03:38
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4楼2021-12-11 19:43:08
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