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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 大家帮我看看我的双酶切电泳图是怎么回事

刚做了个阳性克隆质粒的双酶切,但是总是没有结果,不知道什么原因。M是1kb plus DNA marker,1、2、5(从左边数)没有条带估计是样品的问题。3和4是双酶切后的图,6和7是未酶切的质粒,其中6和3是同一个样品,7和4是同一个样品。不知道为什么同一样品跑出来的条带不在同一水平线上,即使是酶切不成功也不应该是这样的呀。质粒大小约4kb,目的片段约750bp。Marker上样量太小,不清楚,但还可以区分条带。
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kxjh

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果是筛选阳性克隆的话,有可能是假阳性;如果是重组质粒,想获得目的片段或只是验证,可以提高抽质粒浓度或加样量,也可以延长酶切时间试试。
7楼2009-08-26 09:12:31
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-25 18:16
6和7基本还是一个条带吧
可能是胶没跑好或没放正才会出现这种稍微有点偏的情况
质粒肯定是切开了 至于有没有切成两条带不好说
因为你的条带太暗了 它们的亮度是4000:750 有可能看不清的
加大上样量再酶切试试 我做酶切现在都是一个一个切 双切老出问题
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-08-25 18:10:15
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anik

银虫 (正式写手)

你的条带是切开了的。环形的质粒在电泳时比线性的DNA跑的速度快,所以跑在下面。
至于3、4两泳道是切开后的大片断,小片断没有看到会不会是跑出去胶了?你可以提高胶的浓度。
另外胶时,如果是先加入EB的话,那就再多加点,如果后加的,那就染色时间再长点。
4楼2009-08-25 22:30:41
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greatsaint

银虫 (小有名气)

谢谢了!我再试试
5楼2009-08-26 08:09:59
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