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设计的在不同PH下测定的酶活 这个方法有没有问题？ 已有1人参与
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1.配制不同PH的缓冲液，PH（2.0-6.0）的缓冲液使用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；PH（6.0-9.0）的缓冲液使用PBS缓冲液。 2.称量适量马铃薯淀粉，加入1mol·L-1的NaOH溶液加入适量PH2.0的PBS缓冲液，超声均匀，最后定容至0.1（w·v-1）。依次将缓冲液更换成PH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的缓冲液。 3.将酶液稀释10倍 50μl酶液+450μl直链淀粉作为实验组 50μl缓冲液+450μl底物微升底物混合物作为对照组 500μl缓冲液作为空白组 4.将实验组、对照组、空白组放置37°C下反应10分钟。反应结束后取出200微升反应液加入4mlLugol’s碘液以终止反应，并测量其在660nm下的吸光值。 这样设计在不同PH下测定酶活的方法正确吗？有人帮解答吗？好心人给提出建议啊 加ph缓冲液应该加多少？naoh 应该加多少？ |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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一般pH dependent assay会用到混合的buffer 如pH https://www.jbc.org/article/S0021-9258(18)53020-9/pdf good luck! |
2楼2021-12-08 13:36:03