| 查看: 807 | 回复: 0 | |||
北京艾柏森铁虫 (小有名气)
|
[交流]
做实验不会制备细胞爬片怎么行?
|
|
我们在做免疫荧光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡检测（TUNEL）时，免不了要制备细胞爬片，爬片质量完全决定了最后拍照的质量以及实验数据的精准性。今天，就教大家如何制备好的细胞爬片。 一. 实验材料及试剂 盖玻片、培养板、酒精灯、镊子等；75%乙醇、DMEM完全培养基（RPMI-1640完全培养基）、胰酶等。 二、实验内容 爬片准备： 1、24*24盖玻片，刚好用于6孔板。也可用更大的盖玻片，放在大的培养皿中爬片。 2. 盖玻片泡酸过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了，如果不干净的话，细胞帖壁不好），放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒、烤干。 3．盖玻片浸泡75%乙醇10分钟消毒，然后酒精灯上烤干，直接放入培养皿，开始种细胞。重点是玻片是干净的、无菌的。 4.盖玻片在液体中经常有贴壁吸附力，用一般镊子很难一次性夹起，将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以。 细胞进行爬片： 1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中（悬浮细胞直接离心）。 2. 加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。 3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可 保存细胞爬片时，一般用培养皿或避光湿盒，先在皿底放一层面巾纸，然后再放爬片，这样方便做实验时取片。然后盖上盖子，并在盖子上做标记，为避免混淆。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照没有问题的。制备好的细胞爬片是不是很简单呢？ 三、注意事项 1. 使用细胞爬片时（比如在六孔板中放入爬片，六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分，加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底，有时细胞生长边集现象，就是靠近壁边缘密度要高些，这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少）。比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后，加细胞悬液时只滴到玻片上，一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘。 2. 按照实验设计，作用一定时间后取玻片。注意细胞不能太密，否则容易掉片。 |
回复此楼» 猜你喜欢
面上的水很深
已经有18人回复
-
国社科通讯评审
已经有5人回复
-
5个%2F，非固定段22个字母
已经有9人回复
-
生命口C13面上会评时间
已经有11人回复
-
内心匮乏
已经有16人回复
-
生命口面上会评结束了吗大家有知道结果吗？现在还没有结果正常不？
已经有9人回复
-
投英文期刊如何查重
已经有6人回复
-
不要再数国自然申请书的 filecode 的分隔符个数了
已经有21人回复
-
伯胺上甲基求助
已经有7人回复
-
跨出版社商投稿
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
10