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周东浩129

新虫 (正式写手)

[求助] 阳性转化子验证

实验小白,第一次做化学转化,感受态用的是 DH5a,因为需要在原质粒上更换启动子,所以利用反向pcr对质粒进行线性化,利用同源重组把需要的启动子更换上去,随后提取质粒,m13引物验证没有问题。随后在提取质粒的基础上,把目的基因利用同源重组的方式整合上去,操作和上一步几乎相同,可是在利用m13引物验证的时候p不出来,后来发现不是操作和感受态的问题,在更换了新引物进行验证后,发现质粒确实已经转化进入细胞了,请问大佬们为什么会这样,怎么避免这种问题的发生,谢谢。

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苏旻禾

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 周东浩129 at 2021-11-27 23:31:15
实验小白,第一次做化学转化,感受态用的是 DH5a,因为需要在原质粒上更换启动子,所以利用反向pcr对质粒进行线性化,利用同源重组把需要的启动子更换上去,随后提取质粒,m13引物验证没有问题。随后在提取质粒的基 ...

您好,找到失败的原因了吗

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2楼2023-05-15 13:07:24
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