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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 新手弱问：做PCR的目的是什么？
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蝶谷医仙

新虫 (小有名气)

[交流] 新手弱问：做PCR的目的是什么？

刚进实验室老板就交待了课题方向，因为对实验从来没有概念（以前是搞临床的），只大概听明白了老板的意思，观察某种生长因子对体外培养的血管内皮细胞产生的效应，具体说呢，血管内皮细胞的DNA里有某一段基因序列的终产物是某种蛋白，要观察加了这种生长因子后对产生这种蛋白是什么影响。就糊涂了，做PCR好像只是扩增一段目的基因啊，我扩增了这段基因后对检验产生的蛋白有什么作用呢？也就是说，我用培养的细胞做了PCR后，该继续干什么，怎样进行下去我的课题？
完全是晕的，请各位高手赐教一二，帮忙看看我的课题到底是要干什么？具体怎么做，万分感谢！
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1楼 2009-08-25 02:23:44
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从你的叙述来看，你克隆的基因估计是这种生长因子的基因，把他克隆到表达载体上，做转染看对蛋白表达是否有影响！也有可能是2楼说的
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第三军团
6楼2009-08-25 16:18:39
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我不懂这个方向。我觉得是不是做定量PCR或半定量PCR检测这种生长因子对你的目的基因表达水平的影响呢？
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2009-08-25 11:30:29
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-25 12:40
现在要得到某种蛋白质，一般就是直接合成（这种方法难度太高且成本也高）或通过克隆基因进行表达。所以你PCR基因的目的显而易见，就是为了表达得到蛋白质。
你把目的基因扩增出来了，就可以继续转化表达载体，进而通过原核或真核表达系统表达出该种蛋白质，那么你就可以对这种蛋白质的性质或这种蛋白质和其他蛋白质的相互作用进行研究了。
我看你的课题，克隆、表达、纯化等等都是要做的，包括后续的功能鉴定就更复杂了。
不知道我说的对不对，期待高手。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
3楼2009-08-25 12:28:40
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
把基因克隆到表达载体上表达的得到更多更纯的蛋白~~
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
4楼2009-08-25 14:50:51
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