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糖原染色法,显微镜下的桃花源!
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PAS染色全称为过碘酸雪夫氏染色(schiff periodic acid shiff, PAS),又称糖原染色。一般用来显示糖原和其它多糖物质。 染色原理 细胞胞浆中存在糖原或多糖类物质(如糖蛋白、粘多糖、糖脂、粘蛋白等),过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化为二醛基,其与Schiff试剂中的无色品红结合后呈现紫红色,沉积在细胞内多糖所在之处。 染色步骤 组织石蜡包埋切片后脱蜡至水,蒸馏水洗2min(细胞爬片4%多聚甲醛固定后水洗); 滴加过碘酸溶液,氧化5min; 蒸馏水洗10min; 滴加Schiff试剂,侵染10-20min; 倾去Schiff 试剂,流水冲洗10min; 滴加苏木素染色液,染核1-2min; 流水冲洗5min; 酸性乙醇分化液分化; Scott反蓝水洗3min; 常规透明、封片。 染色结果 PAS染色结果 糖原、多糖类物质及其他PAS反应阳性物质呈紫红色,细胞核呈蓝色。 注意事项 高碘酸溶液为透明溶液,配制后放4度冰箱备用,无法从常规的颜色辨别高碘酸的好坏,需要定期更换; 染色试剂均应低温保存,临用前半小时取出恢复室温; Schiff染液染色时间可随温度调整,室温高可减少染色时间,冬季室温低,可延长至20 min左右。 |
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