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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 关于哺乳动物细胞内用cas9做knock in 时供体质粒的几个问题
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haiyingzi

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于哺乳动物细胞内用cas9做knock in 时供体质粒的几个问题 已有1人参与

请问在哺乳动物细胞中用cas9做knock in的donor质粒有什么要求吗？是只要在哺乳动物细胞内可以复制的都可以吗？

另外donor是线性会不会提高重组效率？转染后质粒是否需要消除？  小弟刚了解这个领域，希望各路大神不吝赐教～

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1楼 2021-11-13 14:27:40
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
有可以在哺乳动物细胞内可以自我复制的质粒吗？貌似没有这样的复制子

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2楼2021-11-14 07:52:11
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haiyingzi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张凡云 at 2021-11-14 07:52:11
有可以在哺乳动物细胞内可以自我复制的质粒吗？貌似没有这样的复制子

是吗？我再查查，我不太懂，多谢！

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3楼2021-11-14 11:55:36
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
donor什么都可以，可是pcr出来的一个片段，也可以是一个质粒。转染后的质粒无需消除
楼上说得对，一般来讲哺乳动物细胞是不能复制质粒的（有一个例外，pEPI质粒）
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-11-16 12:49:18
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