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悬浮培养

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从事细胞培养工作13年，现将细胞培养的经历与大家一起分享：
1.?贴壁细胞培养：
???从 hyclone应用第一批商业化的基础培养基以前，很长一段时间病毒的扩增是通过动物组织来进行规模化培养，局限性可想而知。自从哺乳动物基础培养开发出来，大量的动物细胞被分离出来，对应的个性化培养基也呼之欲出，逐渐不同的贴壁细胞对不同的病毒的敏感性也被发搅，如伪狂犬病毒适应的细胞株有PK15、ST、IBRRS-2、BHK21、vero，蓝耳病毒PRRSV适应的细胞株有MA104、marc-145细胞、细小病毒适的细胞株有PK15、ST、IBRRS-2，圆环病毒PCV2适应的细胞株有PK15等等。随之对应制备疫苗的用病毒扩增也从组织转至细胞上，成本、环保、安全、人道等方面有很大的进步，而且病毒扩增效率也得到了很大的提高。当然这一时间主要处于贴壁细胞培养阶段，主要是用方瓶和转瓶模式，这种模式需要大量的人力去消化细胞、摇洗细胞、分装细胞、逐瓶接毒、逐瓶收获、混批测毒、组批灭活，虽然看起来复杂，但相对组织培养病毒是绝对的一大进步。
2.?载体悬浮培养：
???贴壁细胞在转瓶中培养受贴壁面积的限制，细胞一般培养是单层，长多一点无非是更致密的单层，顶多也就2*10^6/cm2,对应病毒增殖的所用到的细胞数量也会受到影响，以致出现病毒增殖瓶颈。
???这时候，人们会想到如何提高单位容积内的表面积，果不出意料，球状载体和片装载体诞生了。球状微载体代表厂家，进口GE的cytodex1-3,目前使用最多仍属cytodex1,国产完全替代品牌有上海启为生物球状微载体cyto1，使用效果基本与GE产品一致，价格也相对便宜，它的工作原理是，球状载体是由一个高分子材料制成，溶于水后能放大，臌胀，形成有一定密度的微球水溶液，密度与水相近，略重，能很好的悬于培养基中，细胞所带的电荷与微球正好相反，培养时能相互吸引最终达到贴附生长的效果。1克球状微载体大致4400平方厘米，相当于19个T225方瓶，培养病毒时高密度细胞有利于病毒更好的增殖，通常培养滴度能提高1-2个滴度。
另一个片状微体叫酯片载体，目前国内使用最多的是武汉塞科成的产品，能达到1克/1300平方厘米，它的优势在于悬浮培养时，不像球状微载体一样需要沉降换液，直接进行灌注培养，时刻有新的培养基补充营养，另个一个优势是在做流感类疫苗，接毒前通常要洗去细胞中残留的血清，片状载体可以抽去老培养基，直接加PBS进行洗数次即可。缺点是细胞生长状态不易观察，通常通过糖耗速度来观察细胞生长长势，而微载体可以直接放倒置显微镜下观察生长状态。片状载体对病毒滴度的提升仅0.5-1个滴度左右。
3.?纯悬浮培养：
??培养基不断更新迭代，用户对培养基中不含动物源成份的需求越来越强，逐渐出现了无血清培养，纯悬浮培养细胞逐渐被驯化出来，目前我所用到的纯悬浮细胞有：BHK21、VERO、sf9、highfive、PK15、ST、HEK293A、HEK293F、MDCK等等，最大规模悬浮培养达到3000L。
培养成本仅贴壁细胞1/10。
?
总的来说，细胞培养的升级其实是培养基更新迭代的产物，两者相互成就。

发自小木虫IOS客户端

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