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悬浮培养

新虫 (初入文坛)


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细胞培养历程
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从事细胞培养工作13年,现将细胞培养的经历与大家一起分享:
1.?贴壁细胞培养:
???从 hyclone应用第一批商业化的基础培养基以前,很长一段时间病毒的扩增是通过动物组织来进行规模化培养,局限性可想而知。自从哺乳动物基础培养开发出来,大量的动物细胞被分离出来,对应的个性化培养基也呼之欲出,逐渐不同的贴壁细胞对不同的病毒的敏感性也被发搅,如伪狂犬病毒适应的细胞株有PK15、ST、IBRRS-2、BHK21、vero,蓝耳病毒PRRSV适应的细胞株有MA104、marc-145细胞、细小病毒适的细胞株有PK15、ST、IBRRS-2,圆环病毒PCV2适应的细胞株有PK15等等。随之对应制备疫苗的用病毒扩增也从组织转至细胞上,成本、环保、安全、人道等方面有很大的进步,而且病毒扩增效率也得到了很大的提高。当然这一时间主要处于贴壁细胞培养阶段,主要是用方瓶和转瓶模式,这种模式需要大量的人力去消化细胞、摇洗细胞、分装细胞、逐瓶接毒、逐瓶收获、混批测毒、组批灭活,虽然看起来复杂,但相对组织培养病毒是绝对的一大进步。
2.?载体悬浮培养:
???贴壁细胞在转瓶中培养受贴壁面积的限制,细胞一般培养是单层,长多一点无非是更致密的单层,顶多也就2*10^6/cm2,对应病毒增殖的所用到的细胞数量也会受到影响,以致出现病毒增殖瓶颈。
???这时候,人们会想到如何提高单位容积内的表面积,果不出意料,球状载体和片装载体诞生了。球状微载体代表厂家,进口GE的cytodex1-3,目前使用最多仍属cytodex1,国产完全替代品牌有上海启为生物球状微载体cyto1,使用效果基本与GE产品一致,价格也相对便宜,它的工作原理是,球状载体是由一个高分子材料制成,溶于水后能放大,臌胀,形成有一定密度的微球水溶液,密度与水相近,略重,能很好的悬于培养基中,细胞所带的电荷与微球正好相反,培养时能相互吸引最终达到贴附生长的效果。1克球状微载体大致4400平方厘米,相当于19个T225方瓶,培养病毒时高密度细胞有利于病毒更好的增殖,通常培养滴度能提高1-2个滴度。
另一个片状微体叫酯片载体,目前国内使用最多的是武汉塞科成的产品,能达到1克/1300平方厘米,它的优势在于悬浮培养时,不像球状微载体一样需要沉降换液,直接进行灌注培养,时刻有新的培养基补充营养,另个一个优势是在做流感类疫苗,接毒前通常要洗去细胞中残留的血清,片状载体可以抽去老培养基,直接加PBS进行洗数次即可。缺点是细胞生长状态不易观察,通常通过糖耗速度来观察细胞生长长势,而微载体可以直接放倒置显微镜下观察生长状态。片状载体对病毒滴度的提升仅0.5-1个滴度左右。
3.?纯悬浮培养:
??培养基不断更新迭代,用户对培养基中不含动物源成份的需求越来越强,逐渐出现了无血清培养,纯悬浮培养细胞逐渐被驯化出来,目前我所用到的纯悬浮细胞有:BHK21、VERO、sf9、highfive、PK15、ST、HEK293A、HEK293F、MDCK等等,最大规模悬浮培养达到3000L。
培养成本仅贴壁细胞1/10。
?
总的来说,细胞培养的升级其实是培养基更新迭代的产物,两者相互成就。

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悬浮培养

新虫 (初入文坛)


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14楼2021-11-21 22:29:18
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2021-11-11 14:47   回复  
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tzynew3楼
2021-11-11 14:48   回复  
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tjw08249楼
2021-11-11 15:51   回复  
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领导SDI10楼
2021-11-11 15:54   回复  
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asdgghjkl11楼
2021-11-11 16:01   回复  
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2021-11-11 20:21   回复  
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