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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 有没有大佬做过FM4-64染料染色的？为何我用了很低的剂量胞内全被染上色了
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Chsir

新虫 (正式写手)

[求助] 有没有大佬做过FM4-64染料染色的？为何我用了很低的剂量胞内全被染上色了 已有1人参与

RT，我用文献推荐的剂量，甚至稀释了很多倍，染色效果依然不好，胞内全被染上色了
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1楼 2021-11-08 14:22:40
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Chsir

新虫 (正式写手)
我是用的甲醇溶解，不知道是否有影响
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2楼2021-11-08 16:24:07
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用户晓晓

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Chsir: 金币+20, ★★★很有帮助 2021-11-15 18:58:38
这个染料和DIO/DID这些染料的染色都是非常迅速的，所以浓度不是最关键的问题，染色时间才是！
我看你是用甲醛固定了。固定过的细胞通透性一般增加，染料更容易进入细胞造成胞内染色，因为胞内一样很多膜结构或者脂类物质。

建议就是染色最长时间不超过2分钟！甚至你可以尝试1分钟或者更短的时间，
还有重要的一点就是第一遍洗要迅速，不能洗好几分钟，因为这时候低浓度的染料残留依然会继续持续染色。
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3楼2021-11-10 20:02:48
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Chsir

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 用户晓晓 at 2021-11-10 20:02:48
这个染料和DIO/DID这些染料的染色都是非常迅速的，所以浓度不是最关键的问题，染色时间才是！
我看你是用甲醛固定了。固定过的细胞通透性一般增加，染料更容易进入细胞造成胞内染色，因为胞内一样很多膜结构或者脂 ...

你好，不好意思才回复。我也发现了这个问题，所以换成蒸馏水溶解了。我现在又面临另一个问题，就是普通的荧光显微镜（自带不同滤片）可能无法区分藻类自带的荧光与这个染料的荧光，很多文献中的照片是如何用共聚焦显微镜拍摄的（因为共聚焦显微镜其实也是荧光显微镜）
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4楼2021-11-15 18:58:27
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用户晓晓

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Chsir at 2021-11-15 18:58:27
你好，不好意思才回复。我也发现了这个问题，所以换成蒸馏水溶解了。我现在又面临另一个问题，就是普通的荧光显微镜（自带不同滤片）可能无法区分藻类自带的荧光与这个染料的荧光，很多文献中的照片是如何用共聚焦 ...

如果自带荧光那么选择染料时候就应该避开自带荧光波段。无论共聚焦还是普通荧光显微镜都是无法区分光是由谁发出来的。

还有就是有一种可能就是虽然是发同种颜色荧光，但自发荧光峰值波长和染料荧光波长有一定的差异（即有非重叠波段），这时候共聚焦就显得“高级”了，因为共聚焦一般同种颜色荧光也配置有不同的波长通道可以选择，这时候选择非重叠波段检测，就能避开自发荧光。
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5楼2021-11-19 21:53:09
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Chsir

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 用户晓晓 at 2021-11-19 21:53:09
如果自带荧光那么选择染料时候就应该避开自带荧光波段。无论共聚焦还是普通荧光显微镜都是无法区分光是由谁发出来的。

还有就是有一种可能就是虽然是发同种颜色荧光，但自发荧光峰值波长和染料荧光波长有一定的 ...

谢谢
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6楼2021-11-20 12:13:53
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