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【实验方法】细胞划痕
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细胞划痕愈合法是测定细胞迁移运动与愈合能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移及修复能力。 特点: 1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。 2. 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。 3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用。 4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。 传统实验方法 实验步骤: 1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。 2. 细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。 3. 细胞铺满板底后,用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法最大的缺陷。) 4. 吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。 5. 加入无血清培养基,拍照记录。 6. 将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。 7. 根据收集图片数据分析实验结果。 |
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