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分子诊断试剂中的“酶”你不行
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在做分子实验，谁也缺不了对基因进行定量定性，PCR是最经典的方法。然而实验结果是否可靠并好看和分子酶的质量是绝对相关。 聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的核苷酸片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊核苷酸复制，PCR的最大特点是能将微量的核苷酸进行大幅扩增，从而达到容易鉴定和识别程度。 PCR到底需要哪些种类的酶？请看中心法则，分子生物学的中心教条。体外的各种聚合酶链式反应就是中心法则的完美运用。 DNA聚合酶——又称DNA依赖的DNA聚合酶 它是以DNA为模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。DNA聚合酶根据聚合酶活力特征和外切酶活性特征的不同，有可以分为多种。在IVD领域中比较常见的酶如下： Bst DNA Polymerase (Large Fragment) Bst DNA聚合酶是来源于源于 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I，通过基因工程手段去除了其5'-3'外切酶活性，而保留了5'-3'聚合酶活性。该酶具有很强的链置换能力，因此是Isothermal amplification (LAMP, RT-LAMP)的绝佳用酶。与野生型Bst DNA聚合酶(大片段)相比，该酶在扩增速度、产量、耐盐性和热稳定性等方面均有大幅提高，同时，该酶可以使用dUTP作为底物进行扩增(Bst大片段无此活性)，非常适合于防污染的等温扩增反应。 由于此次新冠的影响，Bst成为IVD领域内又一个DNA聚合酶宠儿。 Bsu DNA Polymerase (Large Fragment) Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)保留了Bacillus subtilis DNA聚合酶I的5'→3' DNA聚合酶活性，但是缺失了5'→3' 核酸外切酶结构域；该大片段自身缺乏3'→5'外切酶活性，是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶。 逆转录酶——又称为RNA依赖的DNA 聚合酶 该酶以RNA为模板，按5'-3'方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链，这条DNA单链叫做互补DNA (complementary DNA，CDNA)。 先达基因逆转录酶是来自莫洛尼小鼠白血病病毒（Moloney Murine Leukemia Virus）经改造的RNA导向的DNA聚合酶，保留了该逆转录酶的RNase H活性，RNase H可以特异性的水解DNA-RNA杂合链中的RNA；提高了热稳定性，耐受温度可达55℃；并具有极强的延伸能力，可以高产量制备全长的第一链cDNA，产物cDNA可从100 bp-15 kb。 一款PCR/RT-PCR必加的UNG Cod UNG（热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶）是来自Atlantic Cod的Cod Uracil-DNA糖基化酶，能在室温下有效地水解单链或双链DNA上的尿嘧啶，对RNA无活性。Cod UNG对RNA无活性，主要应用于PCR扩增产物的防污染。 该酶是PCR、RT-PCR及qPCR等分析方法中消除carry-over污染的理想选择。在分子诊断中，即使痕量的DNA污染也能显著降低检测灵敏度，因此，UNG酶在分子诊断领域应用非常广泛。 与其他来源UNG酶相比，Cod UNG酶具有高酶活、在温和热处理条件下（55℃）能够完全、不可逆失活等优势，能够提高PCR反应的效率及灵敏度，并能提高PCR产物的长期稳定性，便于下游应用，如克隆构建、测序等。 Cod UNG适用于常见的缓冲体系，兼容多种样本类型。Cod UNG的优异性能，使其易于使用、便于自动化操作、兼容绝大多数工作流程，如PCR、qPCR、RT-PCR等。 全能核酸酶--生物制品规模化生产解决核酸残留困扰 全能核酸酶是来自Serratia marcescens，经基因工程改造的核酸切酶。该酶能将核酸降解成2~5个碱基的5'-单磷酸核苷酸，能高效地降解任何形式（单链，双链，线状，环状）的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性。 重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时，全能核酸酶可以去除核酸污染，有效降低样品粘度，便于下游操作；在细胞或细菌裂解液中加入全能核酸酶，可去除粗提物中的核酸，降低溶液粘度，从而增加蛋白产量；减少存放的外周血单细胞（PBMC）的结块现象；有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响，改善蛋白质的分离效果，增强二维电泳分辨率；去除疫苗（蛋白质类）和病毒样品制备中的DNA污染。 无论在实验室研究还是在工业级生产的过程中，全能核酸酶是去除生物制品中所有形式DNA和RNA的一种有效工具酶。通过高效的核酸去除，可显著提升后续实验、生产的效果及产量，性能优于其他核酸去除方法。 ERA技术 ERA技术（Enzymatic Recombinase Amplification，酶促等温扩增技术）是先达基因公司研发的具有全球自主知识产权等温核酸扩增技术利用抗体制药领域先进的分子设计、蛋白定向进化、核酶亲和力成熟等技术对来源于细菌， 病毒和噬菌体的DNA聚合酶、核酸内切酶等工具酶的分子结构和功能进行改造和优化，从而建立了全新的酶促等温扩增技术。ERA技术方法可在恒定温条件下，7~10分钟即可对痕量靶DNA/RNA特异性区段扩增数亿倍，其低温适应性和灵敏度等方面均取得了重大突破。目前，该技术方法已申请了国家专利和国际专利（申请号：201910262085.3; PCT201910262085.3)。 ERA技术产品的特点： 速度快，操作简单，从样品到出结果，20分钟完成； 灵敏度高，可达1-10copies的极高检测灵敏度。 耐抑制性强，样品只需简单处理，即可直接上样反应。 等温扩增，设备要求低，最适温度为37℃-42℃恒温，降低对设备的要求，具有广泛的设备通用性。 反应与检测闭管进行，避免气溶胶污染，安全性高。 ERA提供了一种快速、准确、便捷的生物核酸检测解决方案。 |
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