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心台明镜

木虫 (初入文坛)

[交流] [求助]细胞爬片盖玻片处理方法

想请教下各位虫友:

做细胞爬片的盖玻片提前应做哪些处理?
个人查了一下基本包括:自来水冲洗-泡酸过夜-纯水洗涤-酒精浸泡过夜-晾干

1.这个步骤是否可行呢
2.请问其中泡酸处理的酸是什么酸
3.有些资料又显示需加多聚赖氨酸增强粘附性,这是否有必要,如果有,添在哪一步比较适合
4.最后一步晾干大多采取烘干法,但是这样烘干的盖玻片不可避免会有水印,表面就模糊了,而晾干在类似搪瓷盘的容器上又会因粘壁而污染,请问哪位有更好的办法呢?

谢谢大家~~
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wangyh2028

铁虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):呃。。楼上的MM,我想知道的是盖玻片的处理方法,不是细胞爬片的制备。。。 8-23 14:42
(一)细胞爬片的制备
(1)如果使用载玻片或盖玻片,必须在使用之前灭菌。可以一次灭菌并贮存在无菌状态下。如果使用少量的盖玻片,用金属镊子夹住盖玻片,在70%乙醇中浸泡,然后在火焰上烤干。要轻轻地镊取,以防破裂。为了方便起见,可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中,使用时放在火焰上处理。如果使用的盖玻片或载玻片数量较多,可以将它们放于专用的金属支架上,然后高压消毒。如果需要的数量更大,则可将其放在耐热的容器中,干烤2小时;
(2)在无菌状态下,把干燥的玻片放于适当的培养皿中。盖玻片可以用金属镊子镊取,圆形盖玻片可以放在24孔培养板的孔中,直径90mm的培养皿能够放入10-15张盖玻片,或者放入一张标准的载玻片;
(3)将悬浮的细胞放入组织培养皿中,培养至少24小时,让细胞贴附在玻片上。要想得到一个较好的结果,在加细胞时,密度应低,以防细胞密度过高。
(4)如果细胞数目有限,可把细胞悬液直接滴在玻片上,静置4小时后再轻轻加入培养液。通过这种方式,大部分细胞将粘附于玻片上,然后再培养约24小时,使细胞适当扩增。此时,取出载玻片或盖玻片可进行固定。
http://q.sohu.com/forum/20/topic/1833339
2楼2009-08-23 13:59:21
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心台明镜

木虫 (初入文坛)

呃。。楼上的MM,我想知道的是盖玻片的处理方法,不是细胞爬片的制备。。。
不过还是谢谢你~呵呵
3楼2009-08-23 14:08:48
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ylcui

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-23 14:42
心台明镜(金币+4,VIP+0):非常感谢~ 8-24 01:21
1。泡的酸是硫酸重铬酸钾洗液。
2。聚赖氨酸包被对于某些不易贴壁的细胞来说,是必须的,加在最后。
3。纯水洗后,竖着放,在超净台里吹干,就不至于有水印。
4。热压灭菌即可,不必用乙醇。
4楼2009-08-23 14:23:50
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-23 14:43
心台明镜(金币+2,VIP+0):非常感谢~ 8-24 21:22
要是你用的是那种国外产的小圆形盖玻片的话不用处理直接可以用
那个事灭菌的,国产的虽说是灭菌的,但是不干净,你需要用酒精加盐酸泡下就可以了,再用超纯水冲干净,灭菌就可以使了,我是这么办的,效果还不错的。
5楼2009-08-23 14:33:45
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