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北京艾柏森铁虫 (小有名气)
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[交流]
哺乳动物细胞蛋白表达系统
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哺乳动物细胞表达系统的优势 1. 能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性； 2. 表达水平高； 3. 高效启动子控制蛋白表达 4. 适合大规模蛋白表达。 艾伯森生物哺乳表达系统 艾伯森生物提供表达载体构建、瞬时转染、表达测试及大规模动物细胞发酵和蛋白纯化等一站式蛋白技术服务。 哺乳动物细胞蛋白表达系统；Protein Expression in Mamalian Cells 表达载体：pcDNA 3.1，pIRES，pTT3，pCEP4，pATX1等常规载体以及我司分子技术人员自行合成与后期改造的专利性载体。 艾伯森生物哺乳表达系统服务内容 1. 载体构建及改进 1) 可将cDNA克隆至客户或艾伯森生物提供的哺乳细胞的表达载体中； 2) 可在表达载体中添加分泌信号肽和纯化标签，促进蛋白分泌表达及满足一步亲和纯化的需求； 3) 能生产并鉴定高效稳定细胞系，适合大规模发酵生产。 2. 稳定基因表达符合长期生存需求。整个实验操作流程提供长期稳定及规模可调的蛋白生产 3. 瞬时表达（TGE） 1) 与稳定基因表达相比，TGE主要适用于短期内制备重组蛋白，一般在10天内即可快速转染，无需质粒DNA的遗传性选择 2) 艾柏森生物的瞬时表达使用悬浮细胞，能够完成体积到100L的蛋白表达。 4. 工艺过程开发及扩大规模。艾柏森生物能够优化表达过程以及表达产物，检测细胞表达量，摸索发酵罐发酵条件，适合大规模发酵生产。 5. 纯化。艾伯森生物拥有完整的蛋白纯化系统，亲和纯化，凝胶过滤，离子交换及疏水层析等纯化方法，能够完成带标签与不带标签蛋白的纯化，以及纯化工艺的摸索。 服务流程 哺乳动物细胞蛋白表达系统；Protein Expression in Mamalian Cells 哺乳动物细胞蛋白表达系统；Protein Expression in Mamalian Cells 经典案例 某生物细胞器基质蛋白，全长334aa，大小37.03kDa，自带Fc标签蛋白，采用293F细胞表达。我们在对其编码基因进行全密码子优化后，把它构建到pTT3载体上，测序验证无误后，进行了30ml体积试表达，如Figure1： 哺乳动物细胞蛋白表达系统；Protein Expression in Mamalian Cells Figure 1. Expression result .Coomassieblue staining. MW. Molecular weight marker.Ø. Non-transfected (negative control). 目的蛋白的最大回收率，我们先后对Flowthrough进行了两次Protein G纯化（Figure2~Figure3），可以看到在第二次纯化后，FT中尚残留的目的蛋白。 哺乳动物细胞蛋白表达系统；Protein Expression in Mamalian Cells Figure2. Target protein purification profile. 哺乳动物细胞蛋白表达系统；Protein Expression in Mamalian Cells Figure 3. Target proteinpurification profile.Reducing-PAGE analysis. 为此我们提高了盐浓度至300mMNaCl，这次洗脱后，FT中剩余的蛋白量显著降低，如Figure4. 哺乳动物细胞蛋白表达系统；Protein Expression in Mamalian Cells Figure 5. Target protein purificationprofile. Coomassie blue staining.Reducing-PAGEanalysis. 再是表达摸索清楚成熟的实验条件后，我们进入大体积制备，2L发酵。 哺乳动物细胞蛋白表达系统；Protein Expression in Mamalian Cells Figure 6. Target protein purification profile and QC gel. |
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