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晴木川

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助:请问构建这个质粒时选择了EcoRI和BamHI位点,设计引物时怎样看是否会发生移码?已有1人参与

载体为:PBV220,酶切位点为EcoRI和BamHI(上游、下游),请问插入目的基因片段时如何看是否发生移码?万分感谢!
质粒序列为:
         1 gaattcccgg ggatccgtcg acctgcagcc aagcttggct gttttggcgg atgagagaag
       61 attttcagcc tgatacagat taaatcagaa cgcagaagcg gtctgataaa acagaatttg
      121 cctggcggca gtagcgcggt ggtcccacct gaccccatgc cgaactcaga agtgaaacgc
      181 cgtagcgccg atggtagtgt ggggtctccc catgcgagag tagggaactg ccaggcatca
      241 aataaaacga aaggctcagt cgaaagactg ggcctttcgt tttatctgtt gtttgtcggt
      301 gaacgctctc ctgagtagga caaatccgcc gggagcggat ttgaacgttg cgaagcaacg
      361 gcccggaggg tggcgggcag gacgcccgcc ataaactgcc aggcatcaaa ttaagcagaa
      421 ggccatcctg acggatggcc tttttgcgtt tctacaaact cttttgttta tttttctaaa
      481 tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt
      541 gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg
      601 cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag
      661 atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg
      721 agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg
      781 gcgcggtatt atcccgtgtt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt
      841 ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga
      901 cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac
      961 ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc
     1021 atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc
     1081 gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac
     1141 tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag
     1201 gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg
     1261 gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta
     1321 tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg
     1381 ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata
     1441 tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt
     1501 ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc
     1561 ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct
     1621 tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa
     1681 ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gttcttctag
     1741 tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc
     1801 tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg
     1861 actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca
     1921 cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat
     1981 gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg
     2041 tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc
     2101 ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc
     2161 ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc
     2221 cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg
     2281 cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga
     2341 gcgaggaagc ggaagagcgc ttatctttcc ctttattttt gctgcggtaa gtcgcataaa
     2401 aaccattctt cataattcaa tccatttact atgttatgtt ctgaggggag tgaaaattcc
     2461 cctaattcga tgaagattct tgctcaattg ttatcagcta tgcgccgacc agaacacctt
     2521 gccgatcagc caaacgtctc ttcaggccac tgactagcga taactttccc cacaacggaa
     2581 caactctcat tgcatgggat cattgggtac tgtgggttta gtggttgtaa aaacacctga
     2641 ccgctatccc tgatcagttt cttgaaggta aactcatcac ccccaagtct ggctatgcag
     2701 aaatcacctg gctcaacagc ctgctcaggg tcaacgagaa ttaacattcc gtcaggaaag
     2761 cttggcttgg agcctgttgg tgcggtcatg gaattacctt caacctcaag ccagaatgca
     2821 gaatcactgg cttttttggt tgtgcttacc catctctccg catcaccttt ggtaaaggtt
     2881 ctaagcttag gtgagaacat ccctgcctga acatgagaaa aaacagggta ctcatactca
     2941 cttctaagtg acggctgcat actaaccgct tcatacatct cgtagatttc tctggcgatt
     3001 gaagggctaa attcttcaac gctaactttg agaatttttg taagcaatgc ggcgttataa
     3061 gcatttaatg cattgatgcc attaaataaa gcaccaacgc ctgactgccc catccccatc
     3121 ttgtctgcga cagattcctg ggataagcca agttcatttt tctttttttc ataaattgct
     3181 ttaaggcgac gtgcgtcctc aagctgctct tgtgttaatg gtttcttttt tgtgctcata
     3241 cgttaaatct atcaccgcaa gggataaata tctaacaccg tgcgtgttga ctattttacc
     3301 tctggcggtg ataatggttg catgtactaa ggaggttgta tggaacaacg cataaccctg
     3361 aaagattatg caatgcgctt tgggcaaacc aagacagcta aagatctctc acctaccaaa
     3421 caatgccccc ctgcaaaaaa taaattcata taaaaaacat acagataacc atctgcggtg
     3481 ataaattatc tctggcggtg ttgacataaa taccactggc ggtgatactg agcacatcag
     3541 caggacgcac tgaccaccat gaaggtgacg ctcttaaaaa ttaagccctg aagaagggca
     3601 gcattcaaag cagaaggctt tggggtgtgt gatacgaaac gaagcattgg ttaaaaatta
     3661 aggagg

求助:请问构建这个质粒时选择了EcoRI和BamHI位点,设计引物时怎样看是否会发生移码?
pBV220.png
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匿名

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感谢参与,应助指数 +1
晴木川: 金币+5, ★★★很有帮助 2021-10-17 10:03:10
本帖仅楼主可见
3楼2021-10-16 17:12:08
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lukechou

木虫 (正式写手)

载体上设计扩增包含目的片段的引物,扩出来比对即可

发自小木虫Android客户端
2楼2021-10-15 17:56:06
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