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2012csc

至尊木虫 (知名作家)

[求助] 蛋白质与小分子结合 热稳定性变化 已有2人参与

蛋白质与小分子存在相互作用,热稳定性如何变化?13年14年的science和nature protocol上的CETSA都是说结合会使蛋白质热稳定性增加,原理是ligand-induced stabilization of target protein,结合后释放自由能,热稳定性增加。在没有其他蛋白干扰的体系下,加入小分子如果使蛋白热稳定性降低又能说明什么,不能说明存在相互作用吗?

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zhongzhenlu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
CESTA的数据和NanoBRET的数据,一起来看,是不是更有说服力一些??
一树猫咪
2楼2021-08-27 18:05:17
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2012csc

至尊木虫 (知名作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhongzhenlu at 2021-08-27 18:05:17
CESTA的数据和NanoBRET的数据,一起来看,是不是更有说服力一些??

检测相互作用的方法很多,实验室只有CETSA这个条件,别的方法老板也不会接受。就是想咨询一下没有其他蛋白等条件干扰,蛋白热稳定性减弱,能不能说明有相互作用。

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坚持就是胜利!
3楼2021-08-27 20:36:29
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xpolice7

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

让蛋白的 Tm 值升高,或者降低,其实都能说明 ligand 与蛋白产生了相互作用,这只是个理化性质上的变化。一般结合形成复合物后使蛋白的稳定性提高,Tm值上升,但是也有的配体与蛋白结合后,Tm明显降低,筛选配体的时候可以将两种都选出来,进一步测Kd 或者IC50 加以验证。
知者不惑
4楼2021-08-31 16:02:04
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