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毕赤酵母蛋白表达不出来… 已有6人参与
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求助各位虫友们，我的毕赤酵母GS115+载体ppic9k，蛋白大小不到20kD，前面的步骤都做的没问题，也进过核酸电泳验证过了，可是到了蛋白表达这一步，就是不表达… 跑蛋白电泳 1，浓度太低，直接跑基本没东西。试过TCA和PEG浓缩之后，条带与空白对照没有相应条带。 2，经过镍柱纯化之后基本没有了…这样应该就是没有表达出来了。也用考马斯检测的试了一下，基本蓝色程度很低，说明蛋白不多。 基本新手，实验室没有人做过相应的内容，问了很多朋友，但是做的东西不太一样，想请教一下朋友们这下要怎么办呢，感激不尽 ps：调整pH的方法还在做，周期较长，换菌种载体什么的也不太清楚是否可以表达… 发自小木虫Android客户端 |
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abcjlm
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6楼2021-08-26 17:24:25
送红花一朵 |
感谢回复 今天最新一批才刚刚发酵出来，调整了ph之后效果还是一样，破菌之后倒是出现了其他的情况，刚跑出来的附图如下，wb因为完全不会所以还在学…不知道这个算是有还是没有，目的条带大小应该是17kd左右。 maker是14.4到97.4kD的 左边三个是空白和两组实验组TCA浓缩后的上清 右边三个是破菌之后TCA浓缩后的空白和两组 麻烦兄弟指导指导这是出来还是没出来呀，谢谢 发自小木虫Android客户端 |
3楼2021-08-25 15:39:22
forhighbio 
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4楼2021-08-25 18:48:06
送红花一朵 |
感谢回复 顺便请教一下，胞内表达是要去除信号肽或者换菌株吗。最新一批电泳还没跑… 总感觉很无奈…前面几步做的都没问题，pcr验证和高拷贝都做的不错…就是表达出问题…心烦 现在好像没法发图片 上个电泳图发不出来 发自小木虫Android客户端 |
5楼2021-08-25 20:42:49
20