| 查看: 1030 | 回复: 0 | |||
[交流]
可溶蛋白表达
|
|
获得大量目的蛋白的最简单最经济的方法是利用原核表达系统表达外源基因。蛋白质一直是生物工程研究的一个重要方面获得大量纯化的蛋白质是蛋白质理化性质与功能研究的基础。虽然20世纪90年代后有许多实验室利用哺乳动物细胞来表达外源蛋白但迄今原核的大肠杆菌表达系统还是最常用的,因为大肠杆藻的遗传 背景清楚表达高效经济方便。实验流程 1基因优化:靶基因序列设计，密码子优化并合成目的基因。 2载体-宿主系统优化:根据蛋白特性构建表达载体，转化质粒到高效表达的大肠杆菌中。 3、表达条件优化:对重组的大肠杆菌进行摇瓶培养，并通过SDS-PAGE电泳检测对表达条件(时间、温度、IPTG浓度)进行严格控制和优化。 4、纯化蛋白:对表达的蛋白采用亲和，离子或凝胶过滤层析等方法进行纯化。最好选择上清，次选蛋白复性，对实验用SDS-PAGE和WesternBlot验证目标蛋白纯度正确性，按照客户要求进行分装或冻干。客户须知 1、无污染的质粒，最小量不得低于100ng2原始质粒图谱及序列文件 3插入基因后质粒的商业测序报告4目标蛋白质相关信息 5最终蛋白一般保存在常规的缓冲液中(Tris-HCIPBS)6我们提供Westem Blot的检测服务交付标准 1、1-3mg蛋白 2、纯度>70% 3、表达菌株 4、实验报告适用客户 本套餐特别适用于已经尝试过蛋白表达小试，结果为两种情况1无表达或表达量偏低2有表达但蛋白为包涵体。针对此类情况我们的重点是优化表达条件，提高表达量，取得可溶性表达蛋白。服务周期2周 |
回复此楼» 猜你喜欢
93BebMhtakh前后11位开头都是大写
已经有7人回复
-
跳槽后在研项目怎么办？
已经有7人回复
-
什么时候开奖？
已经有8人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有26人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有10人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有16人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
人气不行了
已经有8人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有17人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有9人回复
40