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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母分泌表达蛋白，分子量变大?
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马尚0

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母分泌表达蛋白，分子量变大? 已有2人参与

我用目的基因连到载体pPICZaA,转到X33里，表达出来条带在17-20KD之间，理论上应该是14-15KD,这是什么原因啊?还有就是目的蛋白是连有组氨酸标签的，用镍柱纯化也挂不上柱

毕赤酵母分泌表达蛋白，分子量变大?


@天使托 发自小木虫Android客户端
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1楼 2021-08-13 11:12:38
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abcjlm

铜虫 (小有名气)
组氨酸被包埋，酵母胞外蛋白存在糖基化修饰，比目的蛋白大一点很正常

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7楼2021-08-13 15:50:11
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donkey2017

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1,  首先，应该有个空载体的对照实验； 2， 毕赤酵母会有糖基化修饰，导致分子量变大
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11楼2021-08-14 06:49:38
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南京百奥李勇

铜虫 (著名写手)
你好，请问你用的编辑树干毕赤酵母的基因的工具或者试剂盒呀？

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一桶一子一力
2楼2021-08-13 13:25:53
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马尚0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 南京百奥李勇 at 2021-08-13 13:25:53
你好，请问你用的编辑树干毕赤酵母的基因的工具或者试剂盒呀？

什么意思？

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3楼2021-08-13 13:37:18
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南京百奥李勇

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 马尚0 at 2021-08-13 13:37:18
什么意思？
...

我有个客户想改造树干毕赤酵母的基因，不知道能用什么工具或方法，看到你发这个想请教下你

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一桶一子一力
4楼2021-08-13 13:44:31
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马尚0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 南京百奥李勇 at 2021-08-13 13:44:31
我有个客户想改造树干毕赤酵母的基因，不知道能用什么工具或方法，看到你发这个想请教下你
...

找基因，直接构建载体就行了

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5楼2021-08-13 14:14:19
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南京百奥李勇

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 马尚0 at 2021-08-13 14:14:19
找基因，直接构建载体就行了
...

好的，谢谢

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一桶一子一力
6楼2021-08-13 14:57:21
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abcjlm

铜虫 (小有名气)
你的酵母死了吗？还是你发酵液浓缩后跑的胶

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8楼2021-08-13 15:51:41
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马尚0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by abcjlm at 2021-08-13 15:51:41
你的酵母死了吗？还是你发酵液浓缩后跑的胶

酵母没死啊，过镍柱流川液都有条带

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9楼2021-08-13 17:15:20
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马尚0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by abcjlm at 2021-08-13 15:51:41
你的酵母死了吗？还是你发酵液浓缩后跑的胶

上面的图，离MARKER最近的是流川液，后面是发酵上清原液，之后是纯化的（但什么都没有）

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10楼2021-08-13 17:18:09
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